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摘要:作为一种内寄生食线虫真菌,圆锥掘氏梅里霉( Drechmeria coniospora)在常规真菌培养基(如PDA、SDAY和CMA)中生长周期较长(最短为13 d),不利于对其进行科学研究。应用LK-100固体培养基常温培养D.coniospora,通过显微镜观察其生长状态,确定生长周期。研究表明,D.coniospora在LK-100培养基中的生长周期仅8 d,远短于在常规培养基上的生长周期。此外,与常规培养基相比,该培养基获得的D.coniospora分生孢子具有更强的侵染宿主秀丽隐杆线虫( Caenorhabditis elegans)的能力。 LK-100培养基为进行D.coniospora相关研究提供了快速、高效的培养方法。...
摘要:食线虫真菌在生物防治线虫领域发挥着举足轻重的作用,日益受到广泛关注。圆锥掘氏梅里霉( Drechmeria coniospora)是一种典型内寄生真菌,专一地侵染和寄生其宿主———线虫。利用高分辨率的扫描电子显微镜,观察得到D. coniospora侵染秀丽隐杆线虫整个过程的清晰图片,为研究D. coniospora侵染线虫及与侵染相关的基因提供了直接、客观地依据。扫描电镜结果显示,D. coniospora 通过分生孢子完成对线虫的识别,特异地吸附在线虫头部或生殖孔,进而进入线虫体内。分生孢子在线虫体内萌发,长出菌丝。当菌丝生长到一定程度后,进一步穿透线虫体壁,造成线虫死亡。在空气中生长的菌丝体产生新一代分生孢子,这些孢子成熟后,遇到线虫幼虫又将开始新一轮侵染周期。 D. coniospora的这种特异侵染方式和高效侵染能力,使其成为生物防治线虫的潜在优良菌株,具有广阔地应用前景。...
摘要:耐辐射异常球菌是一种超强电离辐射抗性的微生物,其含有大量的胁迫反应相关蛋白及其转录调控因子,在适应环境变化和各种胁迫反应中发挥着重要作用.为深入分析该菌的抗逆基因在不同胁迫下的功能,以β-半乳糖苷酶为报告基因构建了耐辐射异常球菌启动子检测体系.以耐辐射异常球菌基因组为模板扩增groEL、hsp20、relA和relQ启动子片段,将其连接到到大肠杆菌-耐辐射异常球菌穿梭载体pRADZ1上,构建成具有启动子活性检测功能的重组质粒pRADZ-P groE、pRADZ-P hsp20、pRADZ-P relA和pRADZ-P relQ,并将其转化至耐辐射异常球菌,测定β-半乳糖苷酶酶活.结果显示,这些启动子能在耐辐射异常球菌中启动Lac-Z报告基因的表达,并受到胁迫条件的诱导调控.耐辐射异常球菌启动子活性检测方法构建为该菌株特异性胁迫应答系统的研究提供了重要的实验基础....
摘要:耐辐射异常球菌(Deinococcus radiodurans)是迄今发现的最具抗辐射的微生物之一,对干燥、电离辐射、紫外线、强氧化剂等极端条件表现出超强的抗性.耐辐射异常球菌具有很多与修复相关的基因,能够通过代谢途径控制的网络系统有效的调整并修复DNA.目前,对胁迫逆境下耐辐射异常球菌损伤DNA的高效精确修复机制的了解还非常有限.本文综述了耐辐射异常球菌DNA损伤修复方式及其重要功能蛋白的研究进展....
摘要:耐辐射异常球菌是革兰氏阳性菌,具有独特的细胞结构特征.基因组由两条染色体和两个质粒构成,GC含量较高.与异常球菌属的其他菌种不同,耐辐射异常球菌在整个指数生长期细胞都处于感受态,易于遗传操作.由于具有独特的细胞结构和超强的修复系统,耐辐射异常球菌具有超强电离辐射抗性、UV抗性、氧化抗性、干旱抗性等特征,极具研究和应用价值....
摘要:耐辐射异常球菌是一种超强辐射抗性的微生物,能生存于干燥、寒冷、真空等恶劣环境中,其含有大量的胁迫反应相关蛋白及其转录调控蛋白(因子),在适应体内外环境变化和各种胁迫反应中发挥着重要作用.本文就耐辐射异常球菌胁迫反应相关蛋白、转录调节因子和信号转导系统及其调控作用的研究进展进行概述....
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北大核心 CSTPCD CSCD
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摘要:耐辐射异常球菌(DR)具有对致死剂量的电离辐射极端的抗性,但对其超强辐射抗性的分子机制仍缺乏深入了解.耐辐射异常球菌基因组分析显示其拥有许多与修复相关的基因或蛋白,转录组学和蛋白组学分析等研究表明该菌能通过复杂的代谢途径控制的网络系统有效地调整并修复DNA.近年来已分析和鉴定了许多与DNA损伤修复,特别是辐射诱导的DNA双链断裂修复相关的蛋白,这些功能蛋白的研究有助于我们加深对其极端抗性机理的认识.主要针对DR双链断裂修复系统中重要功能蛋白的研究进展进行了概述,以期为DNA修复机理的基础研究及应用研究奠定基础....
摘要:σ因子是原核生物RNA聚合酶的一个亚基,能可逆地结合于RNA聚合酶核心酶的活性催化位点,促进RNA聚合酶正确识别转录起始位点,特异地激活相应基因的表达.耐辐射异常球菌具有极强的抗极端辐射氧化和高温的能力及环境适应性,它含有3个σ因子,其中Sig2可能在该菌环境适应性上发挥着重要作用.构建了耐辐射异常球菌sig2基因的缺失突变株Δsig2,通过48℃高温胁迫冲击实验发现Δsig2对热具有极强的敏感性,相对于对照菌株DR野生型生存能力明显下降;实时荧光定量PCR发现,sig2基因的缺失导致热胁迫相关基因发生不同程度的上调或下调,从而推测sig2基因参与了热胁迫反应的调控....
摘要:旨为深入发掘角蛋白酶重要的基因资源,进一步提高其水解酶活,为工业生产提供理论基础.从分离于新疆戈壁沙漠的戈壁异常球菌(Deinococcus gobiensis)Ⅰ-0中克隆出一个编码角蛋白酶的基因并命名Dgker.构建原核表达载体pET-22b-Dgker并进行体外诱导表达纯化,通过对羽毛水解活性的测定探究粗酶液的最适温度和pH.结果 显示,Dgker蛋白N端前50个氨基酸对蛋白的表达纯化有很大影响.Dgker的重组菌株3d完全分解羽毛,在奶粉平板上重组菌株粗酶液比空载菌株粗酶液降解圈更显著.Dgker适应的温度和pH较为广泛其中最适温度是60℃、最适pH是5.0.Dgker能降解羽毛在以后的工业生产及处理废弃羽毛有极大的应用空间....
摘要:[目的]鉴定和确定被预测为编码干燥相关蛋白的耐辐射异常球菌(Deinococcus radiodurans) drB0118基因功能,探讨该基因对盐、渗透和氧化胁迫抗性的作用.[方法]构建drB0118基因缺失突变株(△B0118),通过氯化钠、D-山梨糖醇和过氧化氢等胁迫冲击实验及氧化胁迫条件下qRT-PCR分析,研究drB0118突变对非生物胁迫反应及氧化胁迫相关基因表达的影响.[结果]drB0118突变导致菌株对NaC1和D-sorbitol胁迫的抗性降低;对氧化胁迫(H2O2)敏感;qRT-PCR分析显示,drB0118突变引起氧化胁迫抗性基因pod和oxyR分别下调4倍和10倍.[结论]D.radiodurans中drB0118参与了盐、渗透和氧化等多种非生物胁迫反应....
摘要:2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)是一类广泛应用于单子叶作物田间杂草防除的除草剂,但其大量施用导致的环境残留已对生态环境造成严重威胁.通过富集培养的方法,从2,4-D污染土壤样品中筛选分离到85株耐受菌,16S rDNA分析显示其分属假单胞菌属(Pseudomonas)、芽孢杆菌属(Bacillus)、赖氨酸杆菌属(Lysinibacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、短杆菌属(Brevibacillus)、沙雷氏菌属(Serratia)、甲基杆菌属(Methylobacterium)、贪铜菌属(Cupriavidus)、红球菌属(Rhodococcus)、拉恩氏菌属(Rahnella)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、阿氏肠杆菌属(Enterobacter)和分支杆菌属(Mycobacterium).其中一株假单胞菌属细菌2,4-D最高耐受浓度达8 g/L.选取部分菌株以2,4-D为唯一碳源培养,通过检测2,4-D降解产物(4-aminoantipyrine显色测量和高效液相色谱)测定菌株的降解能力,并利用质谱(LC/MS、LC-QTOF)检测其代谢产物.共确定11株菌株具有较高的2,4-D降解能力,其中菌株L1、L2、L4和L6在培养72 h后2,4-D的利用率分别为17.3%、28.07%、38.97%和49.02%;LC/MS和LC-QTOF分析检测表明上述菌株将2,4-D脱去侧链基团转化为酚类物质,推测其降解主要为2,4-二氯苯酚(2,4-DCP)途径....
摘要:耐辐射异常球菌对氧化胁迫具有很强的应激与耐受机制,它能够有效地保护蛋白质免受氧化损伤及氧化产物对细胞的毒害作用.耐辐射异常球菌具有超强的抗氧化防御体系包括酶类与非酶类系统.其中锰复合物被认定为活性氧最有效的清除剂.同样耐辐射异常球菌中一系列保守蛋白对细胞进行清理及抗氧化保护作用,也增强了其DNA、RNA与蛋白质损伤的修复能力.本文主要针对耐辐射异常球菌中抗氧化防御系统进行概述,为耐辐射异常球菌的抗氧化机制在医学健康中的应用研究奠定基础....
摘要:全局调控蛋白 IrrE 是异常球菌属中所特有的一种 DNA 损伤修复调节因子,可以显著提高细胞受到损伤时各修复基因的表达。在目前已经完成测序的异常球菌中共发现7种不同来源的 IrrE 蛋白,经序列比对与同源建模,发现其氨基酸序列相似性较高且具有相同的保守结构域,这可能预示了其功能上的相似性。此外,irrE 在大肠杆菌及油菜中表达后,能明显增强宿主的耐盐性,体现了较高应用价值。本综述介绍了异常球菌属及其全局调控蛋白 IrrE 的发现、结构与相关功能,分析与展望了该调控蛋白潜在的应用前景。...
摘要:通过玉米盆栽试验研究不同水分条件下(土壤孔隙含水量20%和80%)土壤微生物群落结构及种群数量的变化.采集玉米生长第60天时的根际土和表层土,通过MiSeq Illumina高通量测序技术扩增细菌和古菌16S rRNA基因分析群落多样性,同时通过绝对定量PCR扩增细菌和古菌16S rRNA基因分析其种群数量.结果表明:高通量测序共得到41 546个细菌OTUs和6 921个古菌OTUs.土壤中细菌的多样性丰富,优势菌群为变形菌(Proteobacteria)和酸杆菌(Acidobacteria),而古菌的群落组成单一,优势菌群为奇古菌(Thaumarchaeota).非度量多维尺度(NMDS)分析表明不同土壤区域中细菌群落结构具有明显差异,而古菌群落结构受水分和土壤区域的影响不明显.定量分析结果显示细菌和古菌数量受土壤区域和水分条件的影响显著.表层土中细菌和古菌数量均显著高于根际土.根际土中细菌和古菌数量在水分充足条件下均显著高于干旱条件,表层土中细菌和古菌数量也表现出相同趋势.本研究结果表明土壤不同区域(生态位)可能是影响土壤中微生物群落最重要的因素....
摘要:通过一次3'端高效热不对称交互PCR(hiTAIL-PCR)和一次长链PCR扩增方法获得了转抗草甘膦基因(G2-EPSPS)玉米品系D-3的外源DNA插入片段的全DNA序列(T-DNA)及两端侧翼序列,并建立了转化体特异性PCR检测方法.结果显示:T-DNA插入片段全长4 318bp,由一个G2-EPSPS基因的表达盒构成.根据T-DNA 5'、3'端侧翼序列设计引物,建立了转化体特异性检测方法,并分析了该方法的灵敏度以及检出限,研究结果表明,3'端定性PCR检测方法特异性强,灵敏度高,检出极限为每100ng模板量的0.05%.本研究结果对转抗草甘膦外源基因检测和生物安全评价及监管具有重要意义....
摘要:耐辐射异常球菌对各种 DNA 损伤均有极好的抗性,该菌选择不同的 DNA 修复途径来应对清除不同 DNA 损伤,包括直接 DNA 反转、碱基和核苷酸切除修复、错配修复和重组修复等。本文对耐辐射异常球菌中重要的同源重组修复系统进行了综述。...
[专利] 发明专利 CN201610893950.0
摘要:本发明发现了一种具有多聚酮类化合物合成功能的基因DrA0326。本发明构建了含有该基因的重组载体,将其在原核宿主细胞大肠杆菌中表达。实验证明,所述基因在原核宿主细胞中表达后,能催化小分子底物进行脱羧缩合反应,可用于微生物催化生物合成。
[专利] 发明专利 CN201510237091.5
摘要:本发明发现嗜热异常球菌Deinococcus geothermalis中的Dgeo0395基因在原核宿主细胞中表达后,能增强宿主细胞干燥、氧化和紫外线辐照抗性。实验证明,经与对照菌株相比,嗜热异常球菌菌株Dgeo0395基因显著增强了原核生物抵抗紫外辐射、氧化和干燥胁迫的能力。
[专利] 发明专利 CN201510236790.8
摘要:本发明用位点突变方式对嗜热异常球菌Deinococcus geothermalis中的IrrE蛋白及其同源蛋白进行了功能基序的氨基酸优化,将功能域基序154LAELAR159中第二位或第五位丙氨酸突变为丝氨酸。实验证明,功能域优化序列能够显著提高IrrE蛋白及其同源蛋白的抗逆功能,尤其是对其表达菌株的紫外胁迫抗性作用可提高10倍以上。
[专利] 发明专利 CN201510728993.9
摘要:本发明设计了用于检测转基因玉米T4-1-1的品系特异性的4对PCR检测引物。本发明还提供了包含所述引物的试剂盒。经实验证明,应用本发明的检测引物对转基因玉米T4-1-1品系特异性的PCR定性检测,特异性强、灵敏度高。
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