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CSTPCD 北大核心
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摘要:肠道微生物群对于维持免疫稳态、调节内皮生长分化、保护细胞等方面均具有重要作用.近年研究发现,肠道菌群失调亦与多种骨关节疾病相关.肠道菌群可通过多种途径影响宿主的骨代谢,诱发骨质疏松症.益生菌可以通过改变肠道菌群的组成和代谢情况来调节宿主的免疫应答,从而提高肠上皮细胞的屏障作用,改善骨质疏松症.肠道菌群失调通过促进炎症反应等多种机制促进强直性脊柱炎(AS)及类风湿性关节炎(RA)的发生,规律口服莫西沙星和低淀粉饮食可以减轻AS症状,乳酸菌类制剂亦可提高RA的临床疗效.靶向调节肠道菌群失调为治疗骨质疏松症、AS、RA提供了新思路....
摘要:目的:探讨力生长因子(MGF)对人外周血CD4+ CD25+ CD127-调节性T细胞(Treg)体外增殖的影响.方法:(1)用免疫磁珠法分选20 mL人外周血CD4+CD25+CD127-Treg,流式细胞仪鉴定细胞纯度,用羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)标记细胞,以不同浓度MGF(0 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L)干预细胞6d后用流式细胞仪检测Treg细胞增殖情况.(2)分离4 mL外周血单个核细胞(PBMC),以不同浓度MGF(0 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L)干预后用流式细胞仪检测Treg细胞占PBMC的比例.结果:分离纯化的Treg细胞,MGF干预后二代细胞占总细胞比例:0 nmol/L MGF组为(49.66±9.86)%,10 nmol/L MGF组为(58.66±5.95)%,100 nmol/L MGF组为(62.6±4.66)%,100 nmol/L MGF组的增殖效率高于0 nmol/L MGF组(P<0.05).PBMC中Treg细胞比例:0 nmol/L MGF组为(17.82±1.23)%,10 nmol/L MGF组为(20.73±1.61)%,100 nmol/L MGF组为(20.29±1.46)%,10 nmol/L MGF组和100 nmol/L MGF组比例均明显高于0 nmol/LMGF组(P<0.05).结论:MGF对CD4+ CD25+ CD127-Treg体外增殖具有促进作用....
[硕士论文] 周林华
脊柱外科 广西医科大学 2018(学位年度)
摘要:本文主要从以下几方面进行论述:
  第一部分 外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的分选及鉴定
  目的:分选出纯度较高的人外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞,为后续细胞实验的准确性提供保。
  方法:取健康志愿者外周血20ml,抗凝后置于冰上保存备用,用淋巴细胞分离液通过密度梯度离心法分离出外周血中的单个核细胞,将所得的单个核细胞经抗体孵育后,通过免疫磁珠分选法分选出CD4+CD25+CD127-调节性T细胞,所得细胞经过流式抗体染色孵育后上流式细胞仪检测纯度。
  结果:通过免疫磁珠法分选得到的CD4+CD25+CD127-调节性T细胞纯度都在90%以上
  结论:免疫磁珠分选外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞,所得细胞纯度较高,可以满足后续实验。
  第二部分 力生长因子对人外周血调节性T细胞体外增殖的影响
  目的:探讨力生长因子(Mechano growth factor,MGF)对人外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)体外增殖的影响。
  方法:(1)用免疫磁珠法分选20毫升人外周血得到的CD4+CD25+CD127-调节性T细胞,用羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)标记细胞后,通过CD3,CD28,IL-2刺激,以不同浓度MGF(0nM,10nM,100nM)干预细胞6d后,经流式抗体染色孵育后,上机检测细胞增殖情况。(2)分离4毫升外周血中单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC),通过CD3,CD28,IL-2刺激,以不同浓度MGF(0nM,10nM,100nM)干预1d后,经流式抗体染色孵育,上机检测TREG细胞占PBMC的比例。
  结果:(1)在分离纯化的TREG细胞,MGF干预6d后二代细胞占总细胞比例,0nM MGF组为:49.66%±9.86%,10nnM MGF组为:58.66%±5.95%,100nM MGF组为:62.6%±4.66%。100nM MGF组的增殖效率高于0nM MGF组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)MGF干预1d后,PBMC中TREG细胞比例,0nM MGF组为:17.82%±1.23%,10nM MGF组为:20.73%±1.61%,100nnM MGF组为:20.29%±1.46%,1OnM MGF组和1OOnMMGF组比例都高于OnM MGF组(P<0.05)。
  结论:力生长因子MGF对人外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞体外增殖具有促进作用。
  第三部分 力生长因子对人外周血单个核细胞中Th17(T helper cell17)/Treg比例的影响
  目的:探讨力生长因子干预外周血单个核细胞后,外周血单个核细胞中Th17/Treg细胞比例的改变
  方法:抽取健康人4毫升外周血,用淋巴细胞分离液通过密度梯度离心法分离出单个核细胞,经CD3,CD28,IL-2(interleukin-2)刺激后,以不同浓度MGF(0,10,100nM)干预1d后,经流式抗体染色孵育,上流式细胞仪检测不同药物浓度Th17与Treg在PBMC中的比例,并计算出不同药物浓度下Th17/Treg比值。
  结果:不同浓度力生长因子干预PBMC1d后,各组Treg细胞占PBMC比例为,0nM MGF组为:21.80%±1.02%,10nM MGF组为:23.55%±1.16%,100nM MGF组为:23.28%±0.70%;各组TH17细胞占PBMC比例为,0nMMGF组为:10.04%±2.08%,10nnM MGF组为:9.29%±1.85%,100nM MGF组为:6.48%±1.26%;各组Th17/Treg比例为,0nM组比值为:0.46±0.10,10nM组比值为0.40±0.09,100nM组比值为0.29±0.06,100nM组Th17/Treg比例与0nnM组相比,明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)
  结论:力生长因子MGF干预外周血PBMC后,外周血PBMC中Treg比例增高,Th17比例降低,Th17/Treg比值下降。
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