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摘要:以椪柑愈伤组织和试管苗叶片为试验材料,采用纤维素酶R-10+离析酶R-10的酶液组合Ⅰ和纤维素酶Worthington+离析酶R-10的酶液组合Ⅱ进行原生质体的分离,比较这2种酶液组合对原生质体的酶解时间、产量及活性氧含量的影响.结果表明,酶液组合Ⅱ所需的酶解时间均短于酶液组合Ⅰ;酶液组合Ⅱ所获得的原生质体产量均高于酶液组合Ⅰ,在愈伤组织中前者产量是后者的9.09倍,在叶片中前者产量是后者的5.29倍,差异显著;酶液组合Ⅰ的愈伤组织原生质体的活性氧水平是酶液组合Ⅱ的1.96倍,且差异显著,而对于叶肉原生质体,2种酶液组合之间的差异不显著.因此可见,酶液组合Ⅱ更适合用于椪柑原生质体的分离....
[期刊论文] 徐小勇 周一鹏 罗丽
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CSTPCD 北大核心
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摘要:在园艺植物育种学教学中引入思维导图教学模式,探讨其在课前、课中、课后3个关键环节的应用,以期提高学生的创新和自主学习能力....
[硕士论文] 周一鹏
园艺 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:柑橘(Citrus)是中国种植面积第一、产量第二的果树,具有极高的经济价值。漆酶(Laccase)是一类含铜离子的糖蛋白氧化酶,在高等植物木质素合成和抗逆境胁迫等方面发挥着重要的作用,具有广阔的应用前景。目前,柑橘漆酶的功能研究甚少,基因表达与调控机制还不清楚。本论文首先介绍了对甜橙(Citrus sinensis)的漆酶基因家族进行生物信息学分析的结果,并克隆了两个具有潜在抗逆功能基因的启动子;其次描述了基于启动子顺式调控元件分析的qRT-PCR检测结果,即该家族基因部分成员在不同组织和器官中的表达特性,以及不同逆境胁迫与激素处理下的表达特性;最后,分析了低温胁迫下柑橘漆酶活力、可溶性蛋白及相对电导率的变化情况。主要研究结果如下:
  1.生物信息学分析发现,在甜橙基因组中共有27个Laccase(CsLAC)基因家族成员,27个成员氨基酸序列相似性较低,且外显子与内含子间隔的结构差异大,该家族基因的内含子数目在2~5个之间,其基因结构与编码产物的理化性质存在明显差异;染色体定位表明它们在6号、7号及8号染色体上聚集,4号、5号及9号染色体上没有漆酶基因的分布。依据编码产物构建的系统发育树表明,家族成员共可分为6簇。启动子分析结果显示,CsLAC基因的启动子区域含有大量顺式作用元件,这些元件暗示该家族基因的启动子可能响应外界刺激如光照、温度、水分、激素和微生物等,因而推测CsLAC基因可能涉及到柑橘的形态发育、对生物和非生物逆境胁迫的适应等多种生物学功能。
  2.使用PCR扩增法从伏令夏橙(Citrus sinensis)中克隆得到了两个具有多种抗逆性功能基因的启动子序列CsLAC11478bp,CsLAC31534bp,分析发现二者启动子顺式作用元件差异较大,暗示它们可能具有不同的功能。
  3.基于生物信息学分析的基础,通过qRT-PCR检测了CsLAC基因在伏令夏橙(Citrus sinensis)不同组织中、不同胁迫处理下的表达水平。结果表明,CsLAC基因具有组织特异性表达特点,在根、茎、叶片和愈伤组织中均检测到表达,特别的是大部分基因在柑橘的根部表达水平较高。研究结果还表明,CsLAC基因能够被多种激素和非生物胁迫诱导表达。如CsLAC1-01和CsLAC1-02在光照、低温、ABA处理和SA处理中显著上调,CsLAC3受低温和MeJA诱导显著高水平表达;CsLAC12能够被PEG处理显著上调;CsLAC9,CsLAC10,CsLAC19能够被高温诱导显著上调。
  4.分析4℃低温处理下伏令夏橙(Citrus sinensis)和枳壳(Poncirus trifoliata)两个柑橘材料的可溶性蛋白含量、漆酶活性及电导率的变化。研究结果表明,伏令夏橙和枳壳的漆酶活性能够被低温诱导显著上调;枳壳的漆酶活性和可溶性蛋白含量在各个检测点始终显著高于伏令夏橙;伏令夏橙的电导率显著高于枳壳。可见不同柑橘品种的耐寒性与漆酶活性、可溶性蛋白含量呈正相关,与电导率呈负相关。
  本论文研究结果为进一步揭示漆酶基因在柑橘中的表达特性、生物学功能尤其在响应逆境胁迫中的作用,以及利用漆酶基因改良柑橘抗逆性奠定了基础。
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