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[期刊论文] 吴晓琼 王超 陈映 余玲
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CSTPCD 北大核心
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摘要:目的 采用传统干眼症检测方法和Keratograph5M眼表综合分析仪调查学龄期儿童干眼症的发病情况,并比较Keratograph5M与传统干眼检测方法在儿童干眼症诊断及随访中的价值.方法 采用传统干眼症检测方法和Keratograph5M对主诉有频繁眨眼和眼部干燥等不适、诊断为睑板腺功能障碍型干眼的学龄期儿童进行研究.共纳入80例儿童.年龄6~12岁,其中男52例,女28例.采用改良的眼表疾病指数(OSDI)调查表进行问券调查.传统干眼症检测方法包括泪膜破裂时间(TBUT)、泪液分泌试验(Schirmer testⅠ)和角膜荧光素染色.Keratograph5M评价非接触性泪膜破裂时间(NIBUT)、睑板腺形态和分布,经过8周物理治疗联合人工泪液治疗后,再分别使用两种方法分别评价上述指标.结果 治疗前干眼评价参数TBUT、NIBUT、Schirmer testⅠ测量值分别为(5.33±2.15)s、(5.74±3.02)s、(7.20±1.87)mm/5 min,经过治疗后干眼评价参数TBUT、NIBUT、Schirmer testⅠ测量值分别为(8.41±1.97)s、(10.13±1.98)s、(12.57±3.06)mm/5 min.传统方法和Keratograph 5M评价泪膜破裂时间的一致性较好(ICC值0.919,P<0.01).结论 Keratograph5M和传统方法评价泪膜破裂时间具有较好一致性.Keratograph5M是无创、快捷的干眼检查工具,可用于儿童睑板腺功能障碍型干眼的诊断及随访....
[硕士论文] 吴晓琼
眼科学 西南医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:构建表达c-Ski/GFP基因的人的慢性免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency viruses,HIV)载体。表达c-Ski基因的慢病毒(HIV-c-Ski/GFP)作为观察组,仅表达GFP基因的慢病毒(HIV-GFP)作为对照组,包装成具有感染能力的病毒颗粒(已在前期研究中完成)。构建小鼠慢性眼压升高模型;将慢病毒导入小鼠前房,观察c-Ski基因在小梁网房水外流通道中的表达情况,探讨c-Ski基因对小鼠慢性高眼压模型中眼压的影响和对小梁网细胞外基质(extracellular matrix,ECM)表达水平的作用及相关可能机制,进而阐明c-Ski基因对小鼠慢性高眼压模型小梁网房水外流阻力的调控及机制研究。
  方法:将60只成年雄性无眼病清洁级C57BL/J6随机分为5个组,实验动物分组具体如下:正常+GFP组(A组),正常+c-Ski组(B组),青光眼组(C组),青光眼+GFP组(D组),青光眼+c-Ski组(E组)。(1)正常+GFP组(A组):小鼠右眼前房注射2μL仅表达GFP基因的慢病毒(HIV-GFP),病毒滴度为3.4×108TU/ml;(2)正常+c-Ski组(B组):小鼠右眼前房注射2μL仅表达c-Ski基因的慢病毒(HIV-c-Ski/GFP),病毒滴度同前;(3)青光眼组(C组):小鼠右眼前房注射直径10μm聚苯乙烯微球PBS混悬液2μL,微球数量约7000个;(4)青光眼+GFP组(D组):小鼠右眼前房注射2μL仅表达GFP基因的慢病毒(HIV-GFP),病毒滴度同前,1周后,同眼前房注射直径10μm聚苯乙烯微球PBS混悬液2μL,微球数量同前;(5)青光眼+c-Ski组(E组):小鼠右眼前房注射2μL仅表达c-Ski基因的慢病毒(HIV-c-Ski/GFP),病毒滴度同前,1周后,同眼前房注射直径10μm聚苯乙烯微球PBS混悬液2μL,微球数量同前。用tonolab回弹式动物眼压计测得各组小鼠右眼眼球前房注射病毒之前眼压均值为基线眼压,小鼠右眼前房注射直径10μm聚苯乙烯微球后分别在1d、4d、7d、10d、13d、17d、19d、22d、25d、28d测量记录各组小鼠右眼眼压的变化值。在28d后处死小鼠,取右眼眼球制作眼球石蜡切片、小梁网组织匀浆,提取小梁网蛋白。小梁网石蜡切片苏木精-伊红(haematoxylin-eosin,HE)染色观察慢病毒前房注射对于小鼠角膜、前房、小梁网、虹膜、Schlemm管等形态结构的影响;小梁网石蜡切片行免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测小梁网、近小管组织(juxtacanalicular connective tissue,JCT)和Schlemm管附近细胞外基质相关蛋白(纤维连接蛋白fiberonectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)、β-链蛋白(beta-catenin,β-catenin))免疫荧光强度的表达情况,免疫印迹法(Western bolt)检测转化生长因子-β2(transforming growthfactor-beta2,TGF-β2)蛋白、Smad2蛋白、Smad3蛋白、磷酸化Smad2(p-Smad2)蛋白、磷酸化Smad3蛋白(p-Smad3)、纤维连接蛋白FN、层粘连蛋白LN、β-链蛋白表达情况。
  结果:1.在小鼠右眼前房注射10μm聚苯乙烯微球后3d、7d、14d、28d手术显微镜下观察术眼眼球无充血、角膜透明、前房未见明显炎症反应、虹膜无出血/嵌顿、晶状体未见混浊、玻璃体腔未见混浊。2.各组小鼠眼压测量的结果:在HIV-c-Ski/GFP/HIV-GFP前房注射之前测得各组小鼠右眼10μm聚苯乙烯微球后各时间点右眼眼压与A、B组相比明显升高(P<0.05);A、B组小鼠各时间点右眼眼压与基线眼压相比没有明显升高或者降低(P>0.05);E组前房注射HIV-c-Ski/GFP后右眼眼压与C、D组相比较,各时间点眼压均有所下降(P<0.05),眼压峰值降低(P<0.05)。3.小梁网组织石蜡切片HE染色后光学显微镜检查发现:A、B、C、D、E组小鼠角膜、前房、小梁网、Schlemm管、虹膜结构未见明显异常。4.小鼠眼球石蜡切片免疫荧光染色后荧光显微镜检查发现:C、D、E组小鼠右眼前房注射直径10μm聚苯乙烯微球后小梁网JCT和Schlemm管纤维连接蛋白FN、层粘连蛋白LN、β-链蛋白β-catenin荧光表达强度与A、B组比较表达明显升高,C与D组相比较小梁网JCT和Schlemm管周围纤维连接蛋白FN、层粘连蛋白LN、β-链蛋白β-catenin荧光表达强度无明显差异,E组前房注射HIV-c-Ski/GFP后与C、D组相比较,小梁网JCT和Schlemm管纤维连接蛋白FN、层粘连蛋白LN、β-链蛋白β-catenin荧光表达强度显著降低;B、E组小鼠右眼小梁网JCT和Schlemm管附近c-Ski荧光表达强度与A、C、D组比较明显增强。5.小鼠右眼眼球小梁网组织Western bolt免疫印迹法检查发现:C、D、E组纤维连接蛋白FN、层粘连蛋白LN、β-链蛋白β-catenin蛋白表达水平与A、B组比较明显增强(P<0.05),C与D组相比较纤维连接蛋白FN、层粘连蛋白LN、β-链蛋白β-catenin表达无明显差异(P>0.05),E组前房注射HIV-c-Ski/GFP后与C、D组相比较,连接蛋白FN、层粘连蛋白LN、β-链蛋白β-catenin表达显著减少(P<0.05);B、E组小梁网c-Ski蛋白表达较A、C、D组显著增加(P<0.05),A、C、D组比较小梁网c-Ski蛋白表达无明显差异(P>0.05);C、D、E组TGF-β2蛋白表达较A、B组比较显著增加(P<0.05),E组前房注射HIV-c-Ski/GFP后与C、D组相比较,小梁网TGF-β2蛋白表达显著减少(P<0.05);C、D组与A、B组比较,小梁网p-Smad2、p-Smad3蛋白表达量明显增加(P>0.05),E组经c-Ski干预后小梁网p-Smad2、p-Smad3蛋白表达量较C、D组降低(P<0.05);各组视网膜Smad2、Smad3蛋白表达水平变化没有差异(P>0.05)。
  结论:1.聚苯乙烯微球前房注射诱导小鼠慢性眼压升高,小梁网ECM表达增加。2.慢病毒(HIV-c-Ski/GFP)前房注射对正常眼压没有影响,对眼前节组织没有毒性作用,慢病毒能够介导c-Ski基因小梁网组织中的表达。3.聚苯乙烯微球前房注射导致眼压升高,激活TGF-β/Smad信号通路,可能是导致小梁网ECM表达增加的机制。4.c-Ski基因可能通过抑制TGF-β/Smad信号通路,抑制Smad2、Smad3磷酸化活化过程,调控小梁网ECM水平,降低眼压。
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