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找到 57 条结果
[期刊论文] 黄慧芳 陈元仲 吴勇
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CSTPCD 北大核心
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摘要:目的研究酞菁锌光敏剂(ZnPcS2P2)介导的光动力学疗法(PDT)对模拟慢性粒细胞白血病缓解骨髓的净化作用.方法采用荧光分光光度法检测K562细胞及正常细胞内的光敏剂含量.锥虫蓝拒染法、MTT比色法、克隆形成实验检测不同浓度ZnPcS2P2介导的PDT对K562细胞增殖能力的影响.正常混合集落形成细胞(CFU-Mix)、粒-单核系造血祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU-E)等集落形成实验检测ZnPcS2P2PDT对正常造血祖细胞的影响.巢式PCR方法检测酞菁锌介导的PDT作用前后混有不同比例K562细胞的骨髓细胞的bcr-abl mRNA表达.结果(1)与ZnPcS2P2共孵育5 h,K562细胞与骨髓正常单个核细胞(MNC)内的ZnPcS2P2含量分别为10.1、2.2(ng/5×105细胞),二者比值达到最高值.(2)0.25μg/ml ZnPcS2P2孵育5 h后,用670 nm激光以53mW/cm2的功率密度、2.1J/cm2的能量密度照射对K562细胞集落形成的抑制率为91.1%,而对正常CFU-Mix、CFU-GM、CFU-E等集落形成的抑制率分别为18.0%、18.6%、17.8%.(3)0.25 μg/mlZnPcS2P2介导的PDT可完全杀灭按1:100至1:1 000比例混入骨髓正常MNC中的K562细胞.结论ZnPcS2P2介导的PDT能选择性杀伤K562细胞,有希望成为新的高效而简便的慢性粒细胞白血病骨髓净化手段....
[期刊论文] 何志鹏 吴勇
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CSTPCD 北大核心
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摘要:骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasm,MPN)是以一系或多系骨髓细胞异常增殖和扩增为特征的克隆性造血干细胞疾病,其中BCR-ABL阴性MPN包括真性红细胞增多症(polycythemia vera,PV)、原发性血小板增多症(essential thrombocythemia,ET)以及原发性骨髓纤维化(primary myelofibrosis,PMF).因为JAK2、CALR及MPL基因突变的发现,MPN的发病机制得以阐释,并为MPN提供了更为完善的分子学诊断标准.随后,越来越多预后相关的新突变基因得到认识,同时发现细胞因子参与MPN的发生发展过程,这为MPN的诊断、预后分层及新的治疗管理提供了理论依据.本文就MPN相关基因突变与细胞因子在疾病进程中的作用机制及预后特点进行简要的综述....
摘要:作为国家首批C-DRG收付费改革试点医院,文章分析了C-DRG试运行期间病案首页质量缺陷常见问题,医院通过强化对临床医师的培训、加强病案首页质量控制管理、完善信息系统建设等对策,病案首页填写准确率及DRG分组成功率不断提升,为下阶段C-DRG收付费改革的正式运行奠定坚实的基础....
[期刊论文] 宋清晓 吴勇 陈元仲
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:目的 探讨CD44抗体HI44a对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、分化的作用机制.方法 以急性髓系白血病细胞株HL-60为研究对象,以ATRA为阳性对照,以同型抗体IgG2a为阴性对照,以HI44a作为实验组,应用台盼蓝拒染法检测HI44a对HL-60细胞增殖的影响,瑞氏染色法及流式细胞学检测HI44a对HL-60细胞分化的影响,RT-PCR方法检测HI44a处理HL-60细胞前后TGFβ1和TGFβR1基因表达变化,应用荧光定量RT-PCR法检测HI44a处理HL-60细胞前后髓系分化相关的细胞因子及受体信号通路(GM-CSFRα、OPN)基因表达变化,以及DNA序列分析法检测HI44a处理HL-60细胞前后OPN异构体表达改变.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测实验组与对照组培养上清液的OPN水平.结果 经HI44a作用后,HL-60细胞增殖受抑;细胞形态变化表现为体积变大,核固缩,核浆比例降低,核仁减少,出现核分叶等特征;细胞表面分化抗原CD15表达上调;HL-60细胞的GM-CSFRα及TGFβ1 mRNA表达水平增高,而OPN mRNA表达水平降低,TGFβR1 mRNA表达水平无变化;OPN序列分析结果表明HI44a作用后OPN的3种异构体的组成发生改变,HI44a处理后的OPN水平明显下降.结论 CD44抗体HI44a通过上调GM-CSFRα、TGFβ1及下调OPN mRNA表达水平,减少OPN的分泌,抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞分化....
摘要:野生型p53基因是一种肿瘤抑制基因,急性髓系白血病(AML)患者伴有17号染色体异常[ i(17q)]者p53基因点突变的发生率可高达40%。大多数AML细胞系,如HL-60、CMK、ML-1 、U937均可检出p53基因严重缺失或者突变[1,2]。我们利用脂质体介导法将两种 p53基因pC53-SN3(含人野生型p53cDNA)、pN53cG(Val135)(32.5?℃表现野生型p53基因功能)分别导入P53蛋白缺失的HL-60细胞中,观察它的表达及其对HL-60细胞的影响。 材料和方法 1 细胞系及培养体系 HL-60细胞由福建省医学科学研究所惠赠。用含体积分数为10%的热灭活胎牛血清(FCS,Gibco/BRL)的RPMI 1640培养液,置37 ?℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度的培养箱中培养。 2 质粒质粒pC53-SN3由美国加州大学旧金山分校Smaha教授惠赠,质粒pN53cG由意大利Regi na Elena CRS 研究所Silvia Soddu教授惠赠,pC53-SN3包含了在 CMV启动子下的人野生型 p53cDNA基因及新霉素(Neo)筛选基因,该质粒经BamHⅠ酶切,去除p53基因片段后,经T4连接酶连接构建pCMV-Neo载体,作为实验对照。pN53cG包含鼠p53cDNA和内含子2~9及Neo基因,该基因所表达的P53蛋白的第135位丙氨酸被缬氨酸所代替,该蛋白在32.5?℃时表现野生型p53功能,37?℃不表达[3]。两种质粒均转化大肠杆菌DH-5α,用plasmid m axi试剂盒(Qlagen公司产品)大量制备质粒,准确定量,分装备用。 3 pC53-SN3、pN53cG转染HL-60细胞及克隆细胞筛选 pC53-SN3、pCMV-Neo、pN53cG各 4?μg与脂质体LipofectinTM (Life Technology公司产品) 10?μl混合后,加入1×10 6/ml?HL-60细胞中,48?h后用含终浓度1?mg/ml?G418及含体积分数为10%FCS的RPMI?1 640筛选克隆细胞,约10~14?d可见克隆细胞开始生长。详见LipofectinTM说明书。 4 克隆细胞P53蛋白表达的检测收集1×106/ml HL-60-SN3、HL-60-Neo、HL-60-pN5 3cG及HL-60细胞,PBS洗涤后,加入鼠抗人 P53单抗1801(Maxim公司产品)10?μl,室温孵育30?min后,加入FITC标记兔抗鼠二抗,PBS洗涤,流式细胞仪(美国BD公司产品)检测P5 3蛋白表达。 5 RT-PCR检测p53mRNA表达应用Trizol (Life Technology公司产品)提取HL-60-SN3、HL -60-Neo、HL-60-pN53cG、 HL-60细胞总RNA,所提取的总RNA经电泳可见明显的28S、1 8S两条带,cDNA合成及PCR扩增体系参照文献[4],cDNA合成及PCR均采用Promega公司试剂。以β-actin为内参照,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,凝胶图像分析仪(Gel Doc 1000型, Bio-Rad)分析,计算p53与β-actin荧光强度比值。所用引物序列应用Oligo软件自行设计,由本所DNA合成仪(PE392型)合成。p53基因扩增片段长度364?b p,退火温度54?℃;β-actin基因扩增片段长度500?bp,退火温度54?℃。引物序列如下: β-actin a 5′-GGCATGGGTCAGAAGGATTCC-3′; b 5′-ATGTCACGCACGATTTCCCGC-3′; p53 a 5′-ATTCTGGGACAGCCAAGTC-3′; b 5′-TAGTTGTAGTGGATGGTGGTA-3′。 6 生长曲线将处于对数生长期的HL-60、HL-60-SN3、HL-60-pN53cG等细胞重悬于含体积分数为10%FCS的RPMI 1640中,终浓度为1×105/ml,置96孔板,每孔200 μl,设3 个平行孔,分别于37?℃(HL-60、HL-60-SN3)及32.5?℃(HL-60-pN53cG)培养,于24 ,48,72,96,120?h后取细胞悬液用锥虫蓝染色后计数活细胞数,取3孔平均值,以时间为横坐标,活细胞数为纵坐标绘制细胞生长曲线。 7 白血病细胞集落培养采用甲基纤维素培养方法,具体方法详见文献[5]。 8 细胞周期及细胞表面CD14、CD15检测收集上述各组细胞,应用Kenesis 50试剂盒(Bio-Rad)及CD14或CD15单抗及二抗(Phamingen公司产品),分别采用流式细胞仪Cellmodifit软件及Cell Quest软件分析DNA变化及CD14、CD15表达。 9 TdT酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)及片段化DNA检测细胞凋亡 TUNEL检测采用原位细胞凋亡检测试剂盒(POD Roche公司产品),具体步骤见说明书。细胞内出现棕黄色颗粒者为凋亡细胞。片段化DNA检测方法见文献[6]。 10 细胞形态学变化上述各组细胞涂片后,经瑞氏染色,普通光镜观察。 11 NBT还原试验具体步骤参见文献[7]。 12 裸鼠移植瘤成瘤实验分别收集HL-60、HL-60-SN3细胞,并以无血清培养液制备细胞悬液,细胞浓度2.5×107/ml,同性4~6周龄BALB/c裸鼠12只,每只鼠于右胁腹皮下注射细胞悬液0.2?ml,每组6只,观察皮下肿瘤结节生长情况及荷瘤鼠生存期,测量瘤块大小。 13 统计学分析采用t检验。...
摘要:目的探讨内源性TGF-β1、TNF-α在三氧化二砷(As2O3)诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用.方法建立As2O3诱导HL-60细胞凋亡模型,应用RT-PCR、定量PCR、ELISA、缺口末端标记(TUNEL)法、片段化DNA分析等方法研究As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中内源性TGF-β1、TNF-α及其受体基因以及TGF-β1蛋白表达的变化;进而研究TGF-β1、TNF-α反义磷酸硫代脱氧寡核苷酸(PSODN)对细胞凋亡的干预作用.结果①As2O3诱导HL-60细胞凋亡过程中伴有TGF-β1、 TNF-α表达上调(处理前后mRNA拷贝数分别为13?546±124,497?216±187和23?273±229,674?217±189),bcl-2表达下调(处理前、后分别为10?424±274和3?361±89),细胞培养24 h上清中TGF-β1蛋白水平明显提高,上升为对照组的2.0倍.②TGF-β1、TNF-α反义PSODN能够明显抑制As2O3诱导细胞凋亡的发生,并使细胞bcl-2 mRNA及蛋白表达恢复到处理前的水平.结论内源性TGF-β1、TNF-α在As2O3诱导HL-60细胞凋亡中起重要作用,两者均可通过下调bcl-2表达促进细胞凋亡....
摘要:转化生长因子β(TGF-β)及其受体的基因突变已被证实在肿瘤形成中具有重要的作用,在许多肿瘤中都发现有TGF-βⅡ型受体(TβR-Ⅱ)表达异常或表达缺失.为了了解急性白血病患者TβR-Ⅱ基因是否存在异常,本研究应用大范围RT-PCR的方法分段扩增急性白血病原代细胞TβR-Ⅱ的编码序列,并结合序列测定技术,分别对6例急性白血病患者以及11例正常人TβR-Ⅱ的编码序列进行突变检测.全部患者经骨髓细胞形态检查符合FAB诊断标准且骨髓原始细胞≥90%.肝素抗凝骨髓4-5 ml,分离单个核细胞,用TRIZOL试剂提取总RNA,反转录后行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物.回收目的片段,克隆到PGEM-T载体,进行序列的测定.结果显示:在检测的病人中有2例病人中存在TβR-Ⅱ的同种型,而此2例病人临床预后不良.结论:部分白血病病人存在TβR-Ⅱ的同种型,而且该同种型可能与预后有关....
摘要:目的 探讨伊马替尼(商品名:格列卫)联合其他化疗方案治疗Ph+急性淋巴细胞白血病(ALL)的疗效和并发症.方法 回顾性分析了6例住院Ph+ALL患者的治疗情况.除1例单用VDLP方案诱导缓解治疗外,其余5例均采用伊马替尼联合其他化疗方案诱导缓解治疗.结果 3例经伊马替尼联合其他化疗方案后获完全缓解(CR);1例获部分缓解(PR).2例治疗后bcr-abl基因转阴性.化疗后都发生了不同程度的感染,以呼吸道和肛周感染为主.结论 伊马替尼联合其他化疗方案治疗Ph(+)ALL有较高的缓解率,但缓解后治疗对长期生存同样重要....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:目的:研究两亲性酞菁锌光敏剂ZnPcS2P2介导的光动力疗法(ZnPc-PDT)联合GM-CSF、B7.1基因修饰的EL-4细胞,对小鼠淋巴瘤的抑制作用.方法:应用反复多次转染的方法,分别将逆转录病毒pLXSN、pLXSNmGM-CSF、pLXSNmB7.1导入EL-4细胞,分别命名为EL-4/pLXSN、EL-4/GM和EL-4/B7.进行ZnPc-PDT时,经荷瘤小鼠的尾静脉注射ZnPcS2P2,4 h后局部用波长670 nm的激光照射瘤体;光源为670 nm的半导体激光仪.将40只荷瘤小鼠分为5组,每组8只,即对照组(不做任何处理)、EL-4/B7+EL-4/GM对照组、ZnPc-PDT对照组、ZnPc-PDT+EL-4/pLXSN对照组、ZnPc-PDT+ EL-4/B7+EL-4/GM实验组.隔天测量瘤块的大小,观察荷瘤小鼠淋巴瘤的生长情况,并计算瘤块的相对体积(RTV).观察荷瘤小鼠的生存期及瘤组织的病理学改变.结果:实验组的生存率高于各个对照组(P<0.01).ZnPc-PDT组小鼠的生存期略高于EL-4/B7+EL-4/GM组(P=0.01).结论:mB7.1、mGM-CSF基因修饰的瘤苗可显著增强ZnPc-PDT的抗肿瘤效应....
摘要:慢性骨髓增殖性肿瘤(MPN)是一组以一系或多系髓系细胞(包括红系、粒系和巨核系)增殖为主要特征的克隆性造血干细胞肿瘤,主要包括真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原发性骨髓纤维化(PMF)等, JAK2V617F阳性为其主要诊断标准之一[1].本研究中,我们回顾性分析259例MPN患者的临床特征并探讨其静脉血栓发生的危险因素....
[期刊论文] 陈元仲 吴勇 陈萍 黄慧芳
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:目的:研究白血病细胞是否存在转化生长因子β1(TGF-β1)量的异常以及这种异常在白血病发病机制中的可能作用.方法:应用ELISA法检测白血病细胞株和原代白血病细胞培养上清TGF-β1水平,进一步应用脂质体介导基因转移法将TGF-β1基因转染HL-60细胞,采用有限稀释法及G418筛选得到抗性细胞,应用RT-PCR、白血病细胞集落培养、裸鼠移植瘤成瘤试验、片段化DNA分析、流式细胞术检测HL-60细胞内TGF-β1、bcl-2、端粒酶反转录酶(hTERT)mRNA的表达变化等方法了解外源性TGF-β1基因对HL-60细胞体内外增殖、凋亡的影响.结果:白血病细胞株和原代白血病细胞培养上清TGF-β1水平明显低于正常对照组(P<0.01),转染TGF-β1基因后,HL-60细胞内TGF-β1mRNA表达上调,bcl-2、hTERTmRNA表达下调,细胞体外增殖受抑制,集落形成抑制率达78.3%,裸鼠移植瘤生长受抑制,荷瘤鼠生存期延长,细胞呈现凋亡特征性的梯形条带,凋亡比例达73.4%.结论:内源性TGF-β1水平降低是白血病的发病机制之一,外源性TGF-β1基因能够抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,该基因通过下调bcl-2、hTERT mRNA的表达而发挥作用....
摘要:本研究探讨裸鼠体内多次传代的高致瘤性HL-60细胞的生物特性的变化,探索高致瘤性HL-60细胞致瘤率提高的机制.用裸鼠体内和体外传代方法建立高致瘤性白血病细胞系HL-60模型,并对其生物特性改变进行比较.用台盼蓝染色法检测HL-60细胞生长水平,流式细胞术分析细胞周期,电子显微镜观察HL-60细胞的超微结构和荧光水平.结果表明:细胞生长速度加快,细胞群体倍增时间缩短;S期细胞比率有上升的超势.细胞线粒体数目显著下降(p<0.01),且多数内室扩张,嵴数目减少,有的空泡化;细胞微丝荧光减弱,差异显著(p<0.01);克隆形成率有明显的增加.结论:裸鼠体内多次传代的HL-60细胞高致瘤性与致瘤细胞增殖能力增强,细胞中线粒体数目与结构的改变和细胞骨架微丝的变化有关....
[期刊论文] 陈元仲 吴勇 梁敏 吕联煌
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北大核心 CSTPCD CA CBST
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摘要:目的: 研究白血病细胞和正常血细胞的细胞因子及相应受体(R)的表达及其意义.方法: 采用逆转录-聚合酶链反应方法检测红白血病细胞系(HEL、K562)、髓系白血病细胞系(HL-60)、单核细胞白血病细胞系(U937)、巨核细胞白血病细胞系(DAMI、MEG-01)、T淋巴瘤细胞系(HUT78)及EB病毒感染的B细胞系(CA)和正常血细胞(CD34+造血干细胞、外周血单个核细胞、成熟粒细胞、巨核细胞及血小板)的多种细胞因子及受体的表达. 结果: ①CD34+造血干细胞同时表达IL-1(α、β)、IL-3、IL-6、GM-CSF、G-CSF及相应受体和干细胞因子受体(SCFR)、血小板生成素受体(MPL)基因,在成熟粒细胞仅表达IL-6、IL-6R、G-CSFR、GM-CSF,巨核细胞、血小板仅表达IL-3R、IL-6、IL-6R、MPL.而TGFβ1、TNFα及相应受体在上述正常血细胞均有持续表达.②HEL、K562、HL-60、U937、DAMI、MEG-01、HUT78及CA可同时表达至少两种以上正调控因子及相应受体,而负调控因子TGFβ1、TNFα及受体在上述各细胞系均有表达.结论: 白血病细胞株细胞存在正性多自泌环节,白血病细胞的正、负自分泌因子失衡与白血病发病有重要关系....
摘要:本研究旨在探讨急性B淋巴细胞白血病(B-SLL)TGF-β信号转导通路基因表达谱.应用荧光实时定量RT-PCR和包含人TGF-β/BMP信号转导通路上113个基因的芯片分别检测经过FAB分型和免疫学分型的B-ALL患者白血病细胞、急性B淋巴细胞白血病细胞株NALM6细胞、Raji细胞的TGFβ1 mRNA及TGF-β信号转导通路上各基因表达谱,以经流式细胞术分选的健康人的外周血B淋巴细胞为对照,比较两者差异.结果表明,同健康人外周血B淋巴细胞相比较,B-ALL细胞、NALM6细胞、Raji细胞TGF-β1表达水平下调,cyc和Smad-1基因表达上调,IL-6、Smad-7基因表达下调.结论:急性B淋巴细胞白血病存在TGF-β信号转导通路异常....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA
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摘要:目的:检测急性髓系白血病细胞CD131基因表达水平及是否存在突变,分析CD131表达水平与急性髓系白血病临床特点的关系.方法:收集44例急性髓系白血病初治病人及25个正常人外周血单个核细胞,应用RT-PCR比较二者CD131基因的表达水平;随机选取15例病人及5例正常人,采用PCR方法扩增CD131全长编码序列,连接到pGEM-T载体,转化Top10感受态细胞,筛选阳性克隆,序列分析检测二者CD131编码序列的突变情况.根据CD131的表达情况,将病例分为CD131阴性组和CD131阳性组,比较两组病例外周血白细胞数、CD34+细胞比例、化疗缓解率.结果:病例组的CD131基因表达水平显著低于正常对照组;序列分析检测到5种CD131的突变体,病例组的CD131的突变率为75.33%,显著高于正常对照组的突变率18.0%.CD131阴性组的CD34+细胞比例(69.1%±20.8%)显著高于CD131阳性组(27.7%±15.7%),化疗后完全缓解率(71.1%)低于CD131阳性组(33.3%).两组外周血白细胞计数差别无统计学意义.结论:CD131基因在急性髓系白血病细胞中表达水平低且突变率高.不表达CD131的急性髓系白血病,其CD34+细胞比例高,化疗完全缓解率低....
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:目的:研究TGF-β1和/或TNF-α反义硫代寡核苷酸(PS-ODNS)对造血干/祖细胞体外扩增的调节作用.方法:采用免疫磁珠分离技术从新鲜脐带血中分离CD34+细胞,用淋巴细胞分离液从骨髓血中分离单个核细胞,应用液体培养及造血祖细胞集落分析检测TGF-β1和/或TNF-α反义PS-ODNS对CD34+细胞数及多向性造血祖细胞(CFU-mix)、粒-单祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(BFU-E和CFU-E)集落数的影响.结果:培养体系中加入TGF-β1反义PS-ODNS后CD34+细胞数、CFU-mix、CFU-GM、BFU-E和CFU-E集落数分别是对照组(仅加细胞因子组)的4、2.6、2.7、1.8、2.1倍;加入TNF-α反义PS-ODNS后CD34+细胞数、CFU-mix、CFU-GM、BFU-E和CFU-E集落数分别是对照组的4、2.9、2.6、1.7、1.8倍;同时加入TGF-β1和TNF-α反义PS-ODNS后CD34+细胞数、CFU-mix、CFU-GM、BFU-E和CFU-E集落数分别是对照组的5.3、2.1、2.7、1.9、1.8倍.结论:采用反义PS-ODNS阻断内源性TGF-β1和TNF-α是造血干/祖细胞体外扩增的有效措施之一....
摘要:目的探讨p53基因诱导白血病细胞凋亡过程中内源性TGF-β1、TNF-α、端粒酶活性、Bcl-2表达的改变及其意义.方法利用脂质体将温敏型p53基因[pN53cG(Val135)]导入p53基因缺失的白血病细胞系HL-60、K562细胞,经G418筛选,获得稳定表达P53蛋白的抗性克隆细胞HL-60 pN53cG,K562-pN53cG细胞.采用缺口末端标记法、片段化DNA分析、RT-PCR、定量PCR、ELISA、PCR-ELISA、流式细胞术等方法检测外源性p53基因诱导白血病细胞凋亡过程中TGF-β1、TNF-α、bcl-2、端粒酶反转录酶(hTERT)mRNA表达变化、细胞上清TGF-β1水平和端粒酶活性及TGF-β1、TNF-α反义PS-ODNS对白血病细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达的影响.结果①外源性野生型p53基因诱导细胞凋亡过程中内源性TGF-β1和TNF-α mRNA表达上调,bcl-2及hTERT mRNA表达下调,细胞培养上清TGF-β1蛋白水平明显升高,端粒酶活性水平下降;②TGF-β1、TNF-α反义PS-ODNS能够明显抑制野生型p53基因诱导细胞凋亡的发生,并使细胞bcl-2 mRNA及蛋白表达恢复到处理前的水平.结论 p53基因诱导白血病细胞凋亡可通过上调内源性TGF-β1和TNF-α水平,下调hTERT mRNA表达及端粒酶活性,抑制bcl-2基因表达而发挥作用....
摘要:利用荧光TaqMan技术(5′核酸外切酶活性)和一种可以实时检测荧光信号的仪器(ABI Prism 7700序列检测系统),在PCR反应完全封闭的情况下可实时检测PCR扩增的动力学变化,能够对标本扩增过程中的起始拷贝数快速、准确地定量,极大地克服了原有PCR技术存在的不足,已逐步成为PCR更新换代的新技术[1,2].目前常规检测β1转化生长因子(TGF-β1)表达多采用竞争RT-PCR及内源性参比基因RT-PCR,它们都属于PCR终点法检测,很难对起始模板数准确定量.我们利用实时荧光定量RT-PCR技术建立了检测TGF-β1 mRNA表达的方法. ...
摘要:为了研究重组人肿瘤坏死因子-α(recombinant human tumor necrosis factor-alpha,rhTNF-α)在体外及体内对人髓系白血病细胞株HL-60细胞的作用,应用MTT法和集落形成试验测定HL-60细胞的增殖抑制,采用AO/EB荧光染色法、流式细胞术和TdT酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞;利用HL-60细胞裸鼠异种移植瘤模型观察给药后瘤体重量、组织病理的改变,并采用透射电镜以及TUNEL法检测瘤组织细胞的凋亡.结果表明:rhTNF-α对HL-60细胞的增殖具有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性;AO/EB染色后可见rhTNF-α处理组HL-60细胞核内染色质浓缩聚集或成碎片,呈现凋亡表象;流式细胞术显示随着rhTNF-α浓度的增加,细胞凋亡阳性率逐渐增高;TUNEL法检测显示,3 200 U/ml rhTNF-α作用于HL-60细胞48小时凋亡阳性率可达37.5%.在体内,rhTNF-α可抑制HL-60细胞裸鼠异种移植瘤生长,抑制率最高可达60.33%;病理检查发现,rhTNF-α处理组的瘤组织有程度不等的出血坏死区域;透射电镜及TUNEL法检测表明,处理组的瘤组织可见有较多凋亡细胞.结论:rhTNF-α在体内、外均可抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡....
摘要:病历摘要 患者男,57岁.因反复面色苍白伴皮肤黄染3个月,头痛、鼻塞5 d,于2009年1月13日入院.患者2008年10月始无诱因出现面色苍白伴皮肤黄染,排茶色尿,在我院查血象:WBC 35.9×109/L,RBC 1.53×1012/L,Hb 47g/L,PLT218×109/L,网织红细胞0.452....
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