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摘要:甲壳动物一直以来都是研究神经肽的良好实验材料,了解甲壳动物的神经肽种类、结构和功能对于神经肽的研究具有积极意义.对目前已经在甲壳动物中发现的咽侧体抑制素、高血糖激素家族、脑啡肽、色素扩散激素、红色素集中激素、肠动态、亲肌神经肽等神经肽的结构特点与生理功能进行了简要综述....
[硕士论文] 吕营
海洋生物学 辽宁师范大学 2013(学位年度)
摘要:中国卤虫(Artemia sinica)是一种对环境适应能力极强的小型甲壳动物,能在高盐水体中生存,由于其生活方式的独特性,目前已成为分子生物学、遗传学、发育生物学等研究中重要的模式生物。
  神经肽及神经肽受体是近年来神经科学研究方面的热点问题,其在各类甲壳动物的生长、发育、繁殖、运动等生理过程所起到的调节作用也越来越受到人们关注。卤虫作为一种小型甲壳动物,其体内也必然存在着神经肽与神经肽受体并参与卤虫的相关生理调节,但目前对卤虫神经肽及受体的相关研究却尚未见报道。
  本研究采用RACE技术,首次从中国卤虫中克隆出一个神经肽受体的cDNA全长序列,命名为As-NGR。采用生物信息学手段对该序列进行了信息学分析;应用原位杂交技术对As-NGR在中国卤虫胚胎发育不同时期的表达部位进行了研究;应用荧光实时定量PCR技术对卤虫不同发育时期,盐度、温度胁迫和蜕皮激素诱导下As-NGR的表达量进行了研究。
  实验结果显示,As-NGR cDNA序列全长1610bp,含一个1527bp的开放阅读框,59bp的5'-非编码区(UTR)和24bp3'-非编码区(UTR)。对该序列进行信息学分析发现,As-NGR编码的蛋白质包含508个氨基酸,分子量为60.8kD,理论等电点为5.73,含有7TM_1和7TM_GPCR_Srw两个结构域,是一个7次跨膜的疏水蛋白,属于G蛋白偶联受体视紫红质家族。
  As-NGR广泛分布于卤虫胚胎发育的各个时期和身体的各个部位,且不同发育时期的相对表达量有所不同。卤虫发育为无节幼虫前,其体内As-NGR的表达量偏低且变化幅度不大,发育为无节幼虫后,As-NGR的表达量上调,且在5d、7d上调幅度明显。随着盐度的增加与温度的下降,As-NGR的表达量均呈逐渐下调趋势,且均低于正常水平。蜕皮激素诱导处理1h,As-NGR在有明显的升高,2h时又迅速下降,趋于正常水平。
  本研究结果表明,As-NGR在卤虫体内的作用可能并非应答温度盐度刺激信号,而是在蜕皮前期神经调节中发挥重要作用的一种神经肽受体。对于卤虫神经肽受体的研究可以帮助了解神经调节在卤虫生长、发育、繁殖、代谢等方面所起作用,对揭示卤虫生长发育各阶段神经调节过程具有一定意义。
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