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摘要:严重急性呼吸道综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS,是2003年2月底由意大利籍传染病专家Carlo Urbani大夫命名的,它是一种通过近距离空气飞沫或密切接触传播的烈性传染性疾病,已经蔓延到世界上数十个国家和地区,病死率超过5%[1,2]....
摘要:医学免疫学是一门重要的医学基础课程和专业课程,需要记忆的知识点多、内容抽象、记忆难.在教学过程中如何发挥教师的主导作用,充分调动学生主体的学习积极性和主动性,对于提高教学质量、真正培养出高质量的现代型医学人才起着重要的作用....
[期刊论文] 叶湘漓 夏立秋
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:[目的]利用核型多角体病毒(NPV)的p74基因与苏云金芽胞杆菌(Bt)的crylAc基因构建融合基因crylAc-p74,构建具有广谱杀虫作用的工程菌.[方法]从Bt4.0718菌株中克隆crylAc基因及其终止子crylAct,从苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)中克隆p74基因,以pMD-T作为大肠杆菌亚克隆载体,分别构建含有目的基因片段的T载体pTlAc,pTp74,pTlAct以及中间载体pTlAct,pTp74Act,获得携带有目的融合基因crylAc-p74的表达载体pHlAcp74;该表达载体电转化至Bt无晶体突变株XBU001,得到目的重组菌株XBU-HlAcp74,[结果]XBU-HlAcp74可表达130 kD的CrylAe蛋白和50 kD的P74蛋白,生测显示P74蛋白可以协同CrylAc的杀虫效果,[结论]本研究成功构建了crylAc基因与p74基因融合的Bt工程菌,为进一步研究和构建新型生物杀虫剂的工程菌株,研制出高效、广谱、安全的杀虫剂提供了新的技术途径....
[期刊论文] 叶湘漓 夏立秋
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CSTPCD CSCD AJ CA
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摘要:SARS-CoV是引起严重急性呼吸道综合症(SARS)的病原体.更多地了解SARS-CoV的基因组、蛋白结构以及它与其它冠状病毒的关系,将有助于SARS疾病的防治....
摘要:目的 探讨脉冲多普勒法(PW)与脉冲多普勒组织成像(PW-DTI)技术在评价尿毒症患者左心室舒张功能中的价值. 方法 对130例尿毒症患者分别采用脉冲波多普勒法(PW)测量二尖瓣口前向血流速度参数:舒张早期峰值速度(E)、舒张晚期峰值速度(A),计算E/A比值;采用PW-DTI技术测量左室侧壁、前壁、下壁、室间隔的二尖瓣环水平DTI参数:舒张早期峰值速度(Em)、舒张晚期峰值速度(Am),计算Em/Am比值;对比分析两种检测方法. 结果 PW-DTI对尿毒症患者左心室舒张功能异常检出率为86.15%,明显高于PW的60.0%,其差异有统计学意义(x2=22.59,P<0.01). 结论 PW-DTI技术可以实时定量地反映心肌运动的方向与速度,客观评价左心室舒张功能,有效避免频谱多普勒检查存在的假性正常化现象....
摘要:适应性免疫的起源一直是免疫学研究的关键问题.文昌鱼被认为是最接近于脊椎动物的祖先,自从被发现以来一直是研究脊椎动物起源与进化机制的经典模式动物.为了在文昌鱼中寻找适应性免疫系统的分子证据,采用金黄色葡萄球菌感染文昌鱼以调查免疫的起源.应用抑制性差减杂交(SSH)技术,通过对差减文库克隆序列的测定,共获得588个表达序列标签(EST).对这些EST进行生物信息学分析和进一步功能分类,发现了一些免疫上调基因,如免疫调控基因、凋亡相关基因、细胞黏附相关基因、转录相关基因、信号传导相关基因等,以及一些非免疫相关基因;这些基因在文昌鱼中绝大多数为首次报道.金黄色葡萄球菌差减文库的成功构建,为调查文昌鱼抗细菌感染的分子事件提供了重要线索,对于这些新发现基因的进一步研究将有助于深入了解免疫系统起源与进化的机制....
摘要:神经病学的专业性强、涉及面广,需要记忆的知识点多、内容繁杂,学生普遍反映难学、难记忆.临床见习可以在有限的时间内帮助学生简明、透彻的理解神经内科疾病,提高临床实习的积极性,对于提高教学质量、培养出高质量的现代医学人才起着重要的作用....
[期刊论文] 叶湘漓 李大力
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北大核心
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摘要:心脏是胚胎发育过程中第一个形成并发挥功能的器官,不同种类动物心脏的结构存在一定的差异性;由于心脏病是人类致死率最高的疾病之一,故心脏一直是整个生物医学界共同关注的焦点....
[硕士论文] 叶湘漓
微生物学 湖南师范大学 2007(学位年度)
摘要:苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是目前世界上应用范围最广的杀虫微生物,其杀虫活性主要来源于芽胞形成期产生的杀虫晶体蛋白。传统的Bt菌株均存在杀虫谱窄、毒力低等缺陷,因此,通过生物技术手段构建高效广谱的Bt工程菌一直是国内外研究的热点和方向。本研究利用Bt的cry1Ac基因与核型多角体病毒的p74基因构建融合基因,并获得新型杀虫工程菌株XBU-H1Acp74。
   从苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californicamulticapsid nucleopolyhedrovirus,简称AcMNPV)中提取病毒DNA,设计引物p74-F/p74-R,以病毒DNA为模版PCR扩增p74基因;从研究室保存的菌株Bt4.0718(CCTCC No.M200016)中提取质粒,设计引物Ac-F/Ac-R和Act-F/Act-R,以质粒为模版PCR分别扩增cry1Ac基因及cry1Ac基因的终止下游序列cry1Act;以pMD18-T作为大肠杆菌亚克隆载体,分别构建含有目的基因p74、cry1Ac、cry1Act的T载体pTp74、pT1Ac和pT1Act;用SmaⅠ和NcoⅠ双酶切pTp74和pT1Act,回收两个酶切片段并进行连接,构建中间载体质粒pTp74Act;再分别用Sa1Ⅰ和Bg1Ⅱ双酶切pT1Ac和中间载体pTp74Act,回收两个酶切片段并进行连接,构建中间载体质粒pT1Acp74;然后将中间载体pT1Acp74和穿梭载体pHT304分别用Sa1Ⅰ和XmaⅠ双酶切,回收两个酶切片段并进行连接,构建表达载体质粒pH1Acp74,将表达载体pH1Acp74电转化至Bt无晶体突变株XBU001,获得目的重组菌株XBU-H1Acp74。
   SDS-PAGE分析显示,工程菌株XBU-H1Acp74可表达130kD的Cry1Ac蛋白和50kD的P74蛋白;原子力显微镜观察显示,工程菌株XBU-H1Acp74可产生呈菱形的晶体蛋白;生测结果显示,工程菌株XBU-H1Acp74与普通工程菌HTX-42(cry1Ac单价基因转XBU001)相比,对初孵棉铃虫在48h的LC50是47.624μg/ml,72h的LC50是29.0782μg/ml,分别低于HTX-42在48h的116.4880μg/ml和72h的90.7526μg/ml,表明P74蛋白可以协同Cry1Ac的杀虫效果。
   本研究成功构建了cry1Ac基因和p74基因融合的Bt工程菌,为进一步研究和构建新型生物杀虫剂的工程菌株,研制出高效、广谱、安全的杀虫剂提供了新的技术途径。
[期刊论文] 叶湘漓 李大力
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CSTPCD 北大核心
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摘要:基因敲除小鼠模型是在动物体内研究基因功能的重要和可靠的手段之一,而构建用于同源重组的基因敲除载体是构建基因敲除小鼠模型的关键一步.条件性基因敲除技术将针对靶基因的修饰作用限制在小鼠的特定发育时期或特定类型的组织细胞中,通过加入具有位点特异性的重组系统,该修饰作用在时间和空间上均处于可调控的状态;条件性基因敲除技术既可以避免某些具有重要功能基因的敲除所带来的早期胚胎致死问题,还可用于精确分析某些多效基因在不同组织或不同发育阶段的特定功能差异.通过合理利用改良的Red重组系统,将两个LoxP位点快速准确地插入到了目标位置,实现了GPR126条件性基因敲除载体的快速构建,为后续的构建GPR126基因敲除小鼠模型、在动物体内研究基因的功能奠定了基础....
摘要:目的:探讨脉冲多普勒组织成像(PW-DTI)技术在评价尿毒症患者左心室舒张功能中的价值.方法:对32例尿毒症患者分别采用脉冲波多普勒法(PW)测量二尖瓣口前向血流速度参数:舒张早期峰值速度(E)、舒张晚期峰值速度(A),计算E/A比值;采用PW-DTI技术测量左室侧壁、前壁、下壁、室间隔的二尖瓣环水平DTI参数:舒张早期峰值速度(Em)、舒张晚期峰值速度(Am),计算Em/Am比值;对比分析两种检测方法.结果:PW测量组E/A正常例数与异常例数间差异有统计学意义,PW-DTI测量组Em/Am正常例数与异常例数间有显著的统计学差异.结论:PW-DTI技术可以实时定量地反映心肌运动的方向与速度,客观评价左心室舒张功能,有效避免频谱多普勒检查中存在的假性正常化现象....
摘要:目的:利用siRNA表达载体构建抑制人类心脏发育候选基因KLHL31表达的pSUPER RNAi载体( pSUPER-KLHL31).方法:化学合成一对编码短发夹RNA序列的、靶向心脏发育候选基因KLHL31的寡核苷酸链60个碱基,退火,克隆到经BglⅡ、Xho Ⅰ双酶切的pSUPER质粒上,构建重组RNAi质粒(pSUPER -KLHL31),通过酶切鉴定及测序分析验证构建效果,将正确构建的质粒转染大鼠心肌细胞H9c2,建立产生逆转录病毒的细胞克隆.通过Western blotting检测转染pSUPER-KLHL31后细胞中KLHL31蛋白的表达量.结果:pSUPER-KLHL31载体经酶切鉴定及测序分析,结果表明60个碱基成功插入到预计位点,且序列完全一致;重组载体转染包装细胞,可表达绿色荧光蛋白,表明包装成功;Western blotting检测结果显示转染pSUPER -KLHL31的细胞中KLHL31蛋白表达量明显降低.结论:靶向KLHL31的pSUPER RNAi载体构建成功,为进一步从分子水平探讨KLHL31在心脏发育中的功能奠定了基础....
摘要:目的:了解本地区泌尿生殖道支原体感染的现状及药敏情况,指导临床合理用药.方法:对1377例泌尿系感染患者进行支原体培养,采用支原体培养、药敏一体化试剂盒对其中的阳性标本进行8种抗生素药敏试验.结果:1377例患者中支原体阳性569例,感染率为41.32%;单一Uu(解脲支原体)感染、单一Mh(人型支原体)感染及Uu+Mh混合感染的感染率分别为26.32%、3.27%、11.73%;单一Uu感染显著高于单一Mh感染和Uu+Mh混合感染;药敏结果显示,敏感率最高的为强力霉素和交沙霉素,耐药率较高的包括环丙沙星、司帕沙星、罗红霉素、红霉素等.结论:本地区泌尿生殖道支原体感染应首选强力霉素和交沙霉素治疗,尤其是在无条件做药敏试验时,而对环丙沙星、司帕沙星等耐药性较高的药物,未做药敏试验时应慎重考虑....
摘要:目的:研究脑脊液置换联合鞘内注射对蛛网膜下腔出血(SAH)的治疗作用.方法:将127例SAH患者随机分为试验组和对照组;对照组应用镇静、止痛、药物(EACA、尼莫地平)等常规治疗方法,试验组在常规治疗的基础上,应用腰穿脑脊液置换和鞘内注射地塞米松.结果:SAH的头痛症状以及脑积水、蛛网膜粘连、脑血管痉挛等主要并发症的症状的发生率、死亡率,试验组明显少于对照组,经统计学处理,有显著差异.结论:脑脊液置换联合鞘内注射治疗蛛网膜下腔出血,可明显降低SAH主要并发症的发生率和死亡率,其方法简便,效果可靠,有非常实用的临床价值....
摘要:目的 探讨脉冲多普勒组织成像(PW-DTI)技术在评价尿毒症患者左心室舒张功能中的价值.方法 对102例尿毒症患者分别采用脉冲波多普勒法(PW)测量二尖瓣口前向血流速度参数:舒张早期峰值速度(E)、舒张晚期峰值速度(A),计算E/A比值;采用PW-DTI技术测量左室侧壁、前壁、下壁、室间隔的二尖瓣环水平DTI参数:舒张早期峰值速度(Em)、舒张晚期峰值速度(Am),计算Em/Am比值;对比分析两种检测方法.结果 102例尿毒症患者用PW法测得二尖瓣血流频谱E/A比值异常,例数为67例,异常例数检出率65%;启动PW-DTI测量程序后,二尖瓣环运动频谱Em/Am比值异常例数增至92例,异常例数检出率90%.PW-DTI对尿毒症患者左心室舒张功能异常检出率明显高于PW法,其差异有统计学意义(x2=21.59,P<0.01).结论 PW-DTI技术可以实时定量地反映心肌运动的方向与速度,客观评价左心室舒张功能,有效避免频谱多普勒检查中存在的假性正常化现象....
摘要:植物多糖是由许多相同或不同结构的单糖通过糖苷键组成的化合物,广泛存在于植物有机体中,具有多种生物学效应.主要对植物多糖的免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗辐射、抗病毒、抗衰老等功能及作用机理进行了综述....
[期刊论文] 姜丽 叶湘漓 李大力
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北大核心 CSTPCD CSCD CA
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摘要:基因敲除小鼠模型是在哺乳动物体内研究基因功能最可靠的方法之一.利用常规的分子克隆的方法构建基因打靶载体往往工作周期长,对于难度特别大的基因有时甚至无法完成打靶载体的构建.通过合理应用Red重组系统和低拷贝中间载体,利用50bp的同源重组序列直接从BAC载体中克隆了长片段的小鼠基因组序列;将得到的基因组序列再次通过重组和改造,构建了Gpr56等基因的完全敲除并带有报告基因的打靶载体,实现了打靶载体的快速构建....
摘要:心血管疾病严重危害人类的健康,已成为生物医学界关注的焦点。心血管系统的研究经历了漫长的历程,可以分为经验学、生理学和分子生物学三个时期,每个时期都有代表性人物和标志性事件。...
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:Netrins是与层粘连蛋白相关的、高度保守的小分子分泌蛋白家族成员,在细胞迁移和轴突导向活动中具有重要的作用,其同源物在多种模式动物中均已发现.Netrins分为2个亚家族:netrins和netrin-Gs;其中的netrin-G亚家族各成员之间具有高度的相似性.目前,在人类中得到确证的只有netrin-G1,推测在人类中应该还有其它的netrin-G亚家族成员以及编码它的基因.从20周龄人胚中提取脑组织的总RNA,用PCR cDNA文库试剂盒制备脑组织cDNA文库,再用特异性引物进行PCR扩增,得到1条人netrin-G的全长cDNA,命名为人netrin-G2,用Northern杂交研究其表达,用进化树分析其与netrin家族各成员间的关系;证实人netrin-G2确实为netrin-G亚家族的1个新成员,该基因位于染色体的9q34,大小为2 428 bp,含有1个1 593 bp的假定开放阅读框,起始密码子为86位的甲硫氨酸,终止密码子为1 678位的TGA,可编码1个大小为530个氨基酸的蛋白质;Northern杂交显示,人netrin-G2在脑组织中特异性表达,而在其它组织中却很少发现,推测人netrin-G2可能在中枢神经系统的发育过程中具有重要的作用,可能与刺激性神经冲动的传递以及神经调节有关....
[期刊论文] 叶湘漓 刘东波 雷立芳
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北大核心
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摘要:研究毛葡萄籽油的化学成分及其药理学作用,为毛葡萄的进一步开发利用奠定基础。运用气相色谱-质谱联用仪分析毛葡萄籽油的化学成分,并研究其对高脂血症大鼠血脂的影响。GC/MS分析显示,毛葡萄籽油成分以不饱和脂肪酸为主,占总量的83.6%,其中亚油酸占61.75%,油酸占18.76%;饱和脂肪酸主要为棕榈酸和硬脂酸,含量分别为9.86%和6.07%;动物药理学试验显示,毛葡萄籽油能显著降低高脂饲料引发的TC和TG升高,提高血清中HDL/LDL的比率,具有调节动物血脂的作用。毛葡萄籽油含有多种对人体有益的成分,具有广阔的市场开发前景。...
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