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华南农业大学
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[期刊论文] 刘霞 吴伟坚
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CSTPCD 北大核心
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摘要:对寄生蜂卵巢发育的研究是生理学和生物防治的重要基础.本文研究了从瓜实蝇蛹刚羽化至死亡的蝇蛹俑小蜂雌蜂的卵巢发育.结果表明蝇蛹俑小蜂内生殖系统由l对卵巢、1对侧输卵管、中输卵管、受精囊、受精囊腺等组成,羽化后卵巢迅速发育,卵巢指数从0.34 mm2增大到0.48 mm2,卵粒数从37.67增加到42.67.雌蜂发育4d后,卵巢逐渐萎缩,卵巢指数、卯粒数减少.本研究得出2日龄雌蜂繁殖力最强,对评估蝇蛹俑小蜂品质和放蜂时间有潜在应用价值,使其能在生物防治过程中发挥更大的潜能....
摘要:禽隐孢子虫病主要是由贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi)寄生于禽类呼吸道、泄殖腔及法氏囊黏膜上皮细胞内所引起的一类严重的机会致病性原虫病....
[期刊论文] 杨建伟 刘霞 李国清
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北大核心 CA
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摘要:鸡隐孢子虫病与球虫病是鸡群中重要的常见的两种原虫病,对鸡的危害十分严重,且分布广泛,世界各地普遍有这两种病的发生与报道....
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北大核心 CSTPCD CSCD AJ CA CBST
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摘要:目的 研制禽类贝氏隐孢子虫的PCR检测试剂盒.方法 根据贝氏隐孢子虫18S rRNA和ITS-1序列,选取遗传标记位点最多的一段核苷酸序列作为特异PCR引物的靶序列,设计、合成了一对针对贝氏隐孢子虫的特异性引物 (YJWF:5'-ACTGATATACAATACCACGG-3'和YR:5'-GCGGATAAAGTTCAGGTTC-3'),对PCR反应条件进行了一系列优化,并分别对试剂盒的特异性、敏感性、稳定性、重复性和保存期等进行了系列研究.结果 该试剂盒能特异性地扩增出贝氏隐孢子虫基因组中相应片段,与安氏隐孢子虫,微小隐孢子虫,柔嫩艾美尔球虫等相关原虫基因组DNA无交叉反应;最低能检测到3.48个卵囊;反复冻融50次对试剂盒没有影响;室温条件下至少可保存4个月.结论 该试剂盒的各项指标达到了贝氏隐孢子虫的检测要求....
摘要:本试验以内转录间隔区1(ITS-1)基因作为研究对象,用PCR技术分别对广东(GD)禽源、广东(GD)和安徽(AH)牛源3个隐孢子虫分离株ITS-1基因进行扩增、克隆、序列测定和分析.将扩增序列用DNAStar(4.0)和ClustalX1.81软件与GenBank上登录的参考序列比对,用Phylip3.67构建种群发育进化树,以确定分离株与其他隐孢子虫虫种之间的亲缘关系.通过对ITS-1基因全序列分析,结果表明:禽源隐孢子虫GD分离株为Cryptosporidium baileyi,牛源隐孢子虫GD分离株和AH分离株均为C.andersoni.因此,ITS-1基因可作为隐孢子虫分离株种群分类的遗传标记,从而为隐孢子虫属的种间鉴定以及进一步的分子流行病学调查和分子诊断学研究奠定了基础....
摘要:采用饱和蔗糖漂浮法、改良抗酸染色法和孢子化试验首次从广东某猴场的猴粪中分离到疑似环孢子虫卵囊.为了对其进行分子鉴定,采用巢式PCR和普通PCR方法,针对环孢子虫属18 S rDNA和ITS基因设计了3对引物,扩增其目的片段,并进行了序列分析.结果显示,卵囊大小为7.5~10 μm,经改良抗酸染色的卵囊染色程度不一,孢子化卵囊内含2个孢子囊,每个孢子囊内含有2个子孢子.通过PCR扩增,获得的18 S rDNA目的片段长712 bp,测序结果表明该猴源环孢子虫18 S rDNA基因与Cyclospora colobi、狒狒环孢子虫、人环孢子虫的相似率较高,在进化树上位于同一分支.获得的ITS-1+片段长760 bp,其中ITS-1序列高度特异,在GenBank中未见同源性序列.结果表明,从猴粪中分离的疑似环孢子虫卵囊应属于环孢子虫....
摘要:目的 对犬粪中的疑似环孢子虫卵囊进行形态学和分子鉴定.方法 对首次在犬粪中发现的疑似环孢子虫卵囊的形状、大小、抗酸染色、孢子化和自发荧光等形态特征进行了观察.根据GenBank已发表的环孢子虫序列设计并合成3条引物,对犬源环孢子虫18SrDNA部分序列进行巢氏PCR扩增,将扩增产物纯化并克隆至载体pMD19-T,挑选阳性克隆测序并进行同源性及系统进化分析.结果 该疑似环孢子虫卵囊与人的环孢子虫卵囊形态特征相似,扩增的18SrDNA片段大小为715bp,与预期目的片段一致.序列同源性和系统发育分析显示该犬源环孢子虫与环孢子虫间的相似性最高,系统进化树中处于同一分支.结论 首次从犬粪中发现的疑似环孢子虫卵囊可以确定为环孢子虫....
[硕士论文] 刘霞
预防兽医学 华南农业大学 2009(学位年度)
摘要:本研究首先以广东观赏鸟体内分离的几株疑似病毒为研究对象,依次对其进行了血清学与分子生物学鉴定以及病毒形态的电镜观察。经HA和HI鉴定,共获得8株H9亚型禽流感病毒和2株新城疫病毒。采用蔗糖密度梯度离心对病毒液进一步纯化,经透射电镜观察,可见该疑似病毒具有禽流感病毒及新城疫病毒直径大小相符的病毒粒子以及囊膜、纤突等形态特征。 根据GenBank中注册的H9N2亚型禽流感病毒HA基因和NA基因序列以及新城疫病毒F基因序列分别设计一对特异引物,采用RT-PCR方法扩增相应的目的片段,将cDNA片段分别克隆至pMD—18T载体进行序列测定。共获得禽流感5个毒株的HA全基因序列和NA基因部分序列以及一株新城疫F基因的部分序列。序列分析结果表明:5个毒株的HA基因cDNA长度均为1683bp,编码560个氨基酸,NA基因部分cDNA长度均为707bp;新城疫F基因部分cDNA长度为1625bp。5个毒株彼此间的HA核苷酸序列的同源性在99.3%~99.9%,氨基酸同源性在98.9%~99.6%。HA蛋白上共有8个糖基化位点,其中6个位于HA1蛋白上,另外2个位于HA2蛋白上,受体结合位点216位为M。HA蛋白切割位点的氨基酸组成为R—S—S—R,为低致病性毒株的典型特征。系统发育进化分析表明,这些毒株均属欧亚种系的Beijing亚群,亚群内的同源性在94.8%以上。5个毒株NA彼此间核苷酸序列的同源性在99.6%~100%,氨基酸同源性在99.1%~100%,彼此间相似性很高。经NCBI BLAST在线分析表明:5个毒株的HA全基因和NA基因部分序列与参考株A/Chicken/Beijing/1/94(H9N2)的同源性均为最高,达98%。而获得的新城疫毒株属于基因Ⅶ型,F蛋白氨基酸的裂解位点为112R—R—Q—K—R—F117,具有典型的强毒株特征;F0氨基酸序列中有6个糖基化部位点和3个与病毒融合相关的重要抗原位点。 根据GenBank数据库中发表的禽流感病毒(AIV)H5和H9亚型编码血凝素的HA基因及新城疫病毒(NDV)编码融合蛋白的F基因序列,按照多重PCR反应引物设计原则,分别在其基因保守区设计出3对特异性引物,扩增片段大小分别为386bp(AIV—H5)、492bp(AIV—H9)和636bp(NDV)。首先建立了单项RT-PCR检测方法,对各引物PCR反应时的退火温度、引物浓度、镁离子浓度等进行了优化。在此基础上,组合成AIV—H5—AIV—H9—NDV多重RT-PCR反应,并对多重RT-PCR反应的引物浓度、共同的退火温度进行了优化,建立了AIV—H5—AIV—H9—NDV多重RT-PCR诊断体系,对该方法进行了敏感性、特异性及重复性试验。结果显示:该诊断方法敏感性高,特异性强,重复性好,为观赏鸟禽流感和新城疫两种病毒分子检测试剂盒的研制奠定了基础。
[硕士论文] 刘霞
农业昆虫与害虫防治 华南农业大学 2017(学位年度)
摘要:蝇蛹俑小蜂Spalangia endius Walker又名东方实蝇蛹俑小蜂,隶属膜翅目的金小蜂科 Pteromalidae。该蜂是一种重要的蛹期单寄生蜂,能寄生多种双翅目昆虫。本文以瓜实蝇Bactrocera cucurbitae为寄主,研究了不同温度以及在最适宜温度下的不同寄主对蝇蛹俑小蜂生长发育和繁殖的影响。同时研究了蝇蛹俑小蜂的卵巢的发育,外生殖器及其感器,以及求偶行为、交配行为和产卵行为。主要研究结果如下:
  1、通过观察蝇蛹俑小蜂卵巢发育情况。结果表明,蝇蛹俑小蜂属于卵育型(Syno vige ny)寄生蜂。蝇蛹俑小蜂内生殖系统由1对卵巢、1对侧输卵管、中输卵管、受精囊、受精囊腺等组成,羽化后卵巢迅速发育,卵巢指数从0.34mm2增大到0.48mm2,卵粒数从37.67增加到42.67。雌蜂发育4 d后,卵巢逐渐萎缩,卵巢指数、卵粒数减少。本研究得出2日龄雌蜂繁殖力最强。
  2、为分析蝇蛹俑小蜂成虫的产卵器和交配器上,与交配行为和产卵行为相关的感受器类型,采用扫描电镜对蝇蛹俑小蜂成虫产卵器与交配器的结构进行观察。蝇蛹俑小蜂雄蜂的交配器上发现4种感器:火山形感器(VS)、浅凹状感器(SD)、栓锥形感器(SS)、钟形感器(CAS);蝇蛹俑小蜂的产卵器上发现5种感器:刺形感器(CS)、火山形感器(VS)、浅凹状感器(SD)、毛形感器1(TS1)、毛形感器2(TS2)。
  3、在26℃,相对湿度60%-70%的实验室条件下,研究了蝇蛹俑小蜂的求偶、交配与产卵行为。蝇蛹俑小蜂求偶、交配过程大致分为5个阶段:寻找和追逐,定位雌蜂,求偶,交尾,休息或继续求偶;交配后开始产卵,产卵过程大致分为定位寄主和寄主检验、产卵器穿刺和产卵、产卵结束和梳理。
  4、研究了不同温度(16,20,24,26,28和32℃)对蝇蛹俑小蜂生长发育和繁殖的影响。结果表明,蝇蛹俑小蜂的发育历期从32℃的22.9d到16℃的109.45d。蝇蛹俑小蜂完成一代的发育起点温度和有效积温分别为5.24℃和417.03DD。在16℃时雌雄蜂寿命最长,分别为46.9d和38d,32℃时的雌雄蜂寿命最短,分别为9.4d和8.4d。26℃的产卵量最大,在26℃和28℃下的内禀增长率较大,分别为0.1389和0.1408。在24℃和26℃时的净生殖率较大,分别为35.38和31.75。可以认为蝇蛹俑小蜂生长发育与繁殖的最适温度为26℃,综合发育历期以及成虫寿命,可以认为蝇蛹俑小蜂生长发育与繁殖的最适温度为26℃。
  5、考察了三种不同寄主对蝇蛹俑小蜂生长发育的影响。结果表明:用橘小实蝇蛹繁殖蝇蛹俑小蜂时,发育历期最长为30.9d。在三种实蝇中,瓜实蝇繁殖的卵期最长,为1.49d;南瓜实蝇繁殖的幼虫期最长,为10.81d;橘小实蝇繁殖的蛹期最长,为9.69d。三种蛹繁殖的蝇蛹俑小蜂雌雄蜂成虫寿命和子代雌性比差异不显著,雌蜂都在12.1d以上,雄蜂都在11d以上,子代雌性比都达到了0.68以上。在3种实蝇上都是羽化当天可产卵,第二天均为产卵高峰。蝇蛹俑小蜂在瓜实蝇、橘小实蝇、南瓜实蝇的内禀增长率分别为0.1454,0.1273和0.1513,在南瓜实蝇蛹上的净生殖率最大,为37.96,其次是瓜实蝇蛹,为32.25,最小的为橘小实蝇蛹,只有23。周限增长率瓜实蝇和南瓜实蝇差异不显著,分别为1.1565和1.1634,橘小实蝇略小,为1.1358。三种实蝇的世代平均历期差异不显著,均为24d。
摘要:应用PCR技术对在鸭粪中发现的疑似环孢子虫的18 S rDNA部分基因和ITS-1+基因进行了扩增,将扩增出的片段纯化后连接至pMD-18T载体上,选取阳性克隆进行序列测定,并利用NCBI在线BLAST程序和MEGA 4软件对测序结果进行了同源性比较和系统发育树构建.结果显示,测得的18 S rDNA序列与环孢子虫的相似性最高(98%),且在系统树中位于同一分支上;测得的ITS-1序列高度特异,在GenBank中未发现同源性序列,可以确定其为环孢子虫的一个新种,暂命名为鸭源环孢子虫....
摘要:为了建立犬源环孢子虫的PCR检测方法,根据该环孢子虫18 S rDNA基因序列,设计1对特异性引物;通过阳性参照摸索出该检测方法的最佳反应条件,进行了特异性和敏感性试验;并对临床样品进行了检测.结果显示,该PCR检测方法能特异性地扩增出犬源环孢子虫18 S rDNA中379 bp的片段,与牛源环孢子虫、柔嫩艾美耳球虫、人隐孢子虫、蓝氏贾第虫、刚第弓形虫、毛首线虫、大片吸虫、犬弓首蛔虫等8种虫体基因组DNA无交叉反应;最低能检测到84 fg的阳性参照DNA,检测的157份临床样品中8份为阳性,比传统镜检方法多出3份.结果表明,建立的PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,可用于犬环孢子虫的临床检测....
摘要:菲莱氏温扬球虫是鸭球虫病的重要病原之一,为了寻找种特异性的遗传标记,本研究采集广东省某鸭场的新鲜鸭粪,通过Sheather's蔗糖漂浮法收集球虫卵囊,经形态学鉴定为菲莱氏温扬球虫;提取该球虫DNA样品,经过PCR扩增,首次获得了该虫的18S rDNA基因部分片段;对该基因进行了克隆和测序,比较了该虫株与其他原虫的亲缘关系.结果显示,对菲莱氏温扬球虫序列与艾美耳科其他球虫关系较近,系统进化树分析属于艾美耳科的另一分支.表明18S rDNA基因在鸭菲莱氏温扬球虫的分类鉴定上是一种有效的分子标记....
摘要:选择柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫人工混合感染岭南黄鸡,采用笼养和平养的方法,比较球安(Avatec)与甲基盐霉素、盐霉素、马杜霉素和球虫康对鸡球虫感染的保护效能.笼养试验结果显示,球安按110 mg/kg添加到饲料中,对3种球虫超高剂量(15万个孢子化卵囊)的混合感染具有很强的抑杀作用,其抗球虫指数和饲料报酬分别为181.5和1.77.平养试验显示,在球虫持续感染的情况下,从增重方面看,与阳性对照相比,球安组、甲基盐霉素和球虫康组在20、30、40和50日龄段体重始终差异极显著.除了盐霉素和马杜霉素以外,各试验组屠宰率与阳性对照相比差异不显著;与阴性对照相比差异不显著.在胸肌率方面,无论是与阴性对照还是与阳性对照相比,均为差异不显著....
摘要:为探讨盐荒地、沙丘和海子对耕地排盐的作用和机理,于2013—2016年在内蒙古河套灌区张连生研究区展开试验,利用土壤水分、盐分以及地下水盐分、埋深变化的观测数据,经SWAP模型率定和验证,对试验区水盐动态变化进行模拟和分析.结果表明,SWAP模型能够较好地反映试验区各地土壤水盐的垂直动态变化规律.模型验证结果显示,土壤水分的均方根误差均小于0.03 cm3·cm-3,土壤盐分均方根误差均小于0.12 g·kg-1,且二者平均相对误差均小于16%.地下水动态分析表明试验区地下水走向基本为从西北流向东南.研究表明,耕地含水量受灌水影响较大,水分逐渐向深层渗漏并侧向补给盐荒地和沙丘.沙丘表层含水量低,而深层水分可侧向补给耕地、盐荒地.耕地盐分在灌溉期向盐荒地和沙丘运移,最终汇集到海子,盐荒地在作物的生育期积累盐分,而盐分在秋浇期流失.耕地和盐荒地的地下水在灌溉期侧向补给沙丘和海子,非灌溉期由沙丘的地下水侧向补给耕地、盐荒地及海子....
[专利] 发明专利 CN201010262894.3
华南农业大学 2010-12-15
摘要:本发明涉及PCR检测领域,具体涉及一种利用多重PCR检测鸭粪中三种原虫的方法,其中所述原虫为贝氏隐孢子虫、环孢子虫和菲莱氏温扬球虫。本发明检测方法是根据鸭环孢子虫ITS-1基因,菲莱氏温扬球虫18S?rRNA基因和贝氏隐孢子虫ITS-1+片段,分别设计出3对特异性引物,通过多重PCR反应可以快速准确地检测鸭粪中的贝氏隐孢子虫、环孢子虫和菲莱氏温扬球虫卵囊,对鸭的隐孢子虫病、环孢子虫病和球虫病作出鉴别诊断。本发明检测方法可以同时检测三种原虫,敏感性、特异性好,比常规PCR更加快捷经济,可用于鸭肠道原虫病的鉴别诊断和分子流行病学调查或水源性隐孢子病和环孢子虫病爆发的风险评估。
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