绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
获取范围
  • 1 / 1
  (已选择0条) 清除 结果分析
找到 3 条结果
摘要:目的 通过观察皮质体感诱发电位(CSEP)和下传神经源性运动诱发电位(DNEP)在兔脊髓缺血早期的变化特点,探讨CSEP和DNEP在脊髓损伤早期评估中的作用.方法 通过结扎不同水平的腰动脉建立不同程度的永久性脊髓缺血损伤兔模型,分为5组(分别结扎左肾动脉和动脉分叉间不同水平的腰动脉,包括1~5根组),造模后连续记录CSEP和DNEP60min,2d后取缺血中心区标本进行HE染色.采用Tarlov运动功能评分评估运动功能.分析CESP和DNEP的波幅变化与结扎后运动功能的关系.结果 4根组和5根组的CSEP波幅与手术前的基线波幅百分比与结扎前相比,差异均有统计学意义(均P <0.05);而其他各组与结扎前相比,差异均无统计学意义(均P >0.05).3根组、4根组以及5根组的DNEP波幅与手术前的基线波幅百分比与结扎前相比,差异均有统计学意义(均P <0.05);而其他各组与结扎前相比,差异均无统计学意义(均P>0.05).4根组和5根组结扎后2d的运动功能与结扎前相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);其他各组与结扎前相比,差异均无统计学意义(均P>0.05).CESP和DNEP波幅变化与血管结扎后2d的运动功能呈正相关(r =0.97,P<0.001;r =0.95,P<0.001).结论 CSEP和DNEP均可预测脊髓损伤后的运动功能;DNEP对脊髓缺血性损伤更敏感,对运动功能更特异,能够在脊髓缺血早期发现缺血性损伤....
摘要:探讨"超星学习通"联合英文标准化病人的教学模式在留学生妊娠期高血压疾病教学中的应用价值,通过基本理论客观知识题、病例分析题、教学病历书写和问卷调查等评价方法,比较联合教学模式与传统教学方法的临床教学效果.结果显示,联合教学模式在留学生妊娠期高血压疾病教学中有助于激发学生学习兴趣,培养独立思考和临床应对能力....
[硕士论文] 刘莉
病理学与病理生理学 福建医科大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptors,CARs)是源自编码单链可变片段(scFv)的转基因的嵌合免疫球蛋白T细胞受体(TCR)分子,与T细胞的免疫受体酪氨酸活化基序相结合,能特异识别和结合肿瘤相关抗原的抗体,诱导细胞构象变化,导致转录因子表达和细胞因子释放,从而诱导T淋巴细胞产生针对肿瘤细胞的细胞毒活性。近年来,研究者们通过对CARs胞内信号区改造,旨在提高嵌合抗原分子传递信号的强度和持续时间,CAR-T已经历了从第一代到第五代的变迁,成为了肿瘤免疫治疗的新热点。
  肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是世界上最常见的癌症之一,尽管HCC现阶段的临床治疗水平有了极大提高,但死亡率并无明显改善,5年以上生存率低至25%~39%左右。磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(Glypican-3,GPC3)是磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族的成员之一,据报道该蛋白在原发性肝细胞癌中表达率高达80%,但在正常肝组织、肝硬化组织或癌旁组织中不表达。由于GPC3对肝细胞癌的诊断具有特异性强和敏感性高的优势,GPC3有望成为诊断和治疗肝癌的新靶点。
  本课题组前期研究将GPC3-CAR导入T淋巴细胞,已构建第二代和第三代的GPC3-CAR,成功转染T淋巴细胞,并进行体外杀伤实验,取得阶段性成果。本课题组在前期研究的基础上,进一步设计动物体内实验,旨在验证GPC3-CAR对肝癌靶向治疗的有效性,筛选靶向性好、杀伤性强、安全性佳的GPC3-CAR,为GPC3-CAR过继T细胞疗法治疗肝癌的临床应用奠定基础。
  方法:
  1、肝癌细胞株的培养
  本课题组在前期研究上已筛选出肝癌细胞GPC3高表达HepG2和GPC3不表达的Sk-Hep-1肝癌细胞株。选取状态良好的HepG2和Sk-Hep-1肝癌细胞株用10%完全培养基(即胎牛血清:MEM培养基=1:9)进行培养及大量扩增。
  2、小鼠肝癌荷瘤模型的构建
  选择6~8周的44只NOD/SCID小鼠(购自上海灵畅生物科技有限公司,合格证号2013001828737),肝癌细胞株培养到一定数量后,吸取处于细胞对数生长期的肝癌细胞混悬液,稀释为5×106/0.2ml,摇匀注入小鼠右大腿皮下,建立HepG2和Sk-Hep-l皮下瘤肝癌荷瘤小鼠模型。
  3、GPC3-CAR基因修饰的T细胞的制备
  抽取健康人外周血,T细胞分选磁珠分选T淋巴细胞,用细胞因子(300U/mL)优化培养T淋巴细胞。用第二代GPC3-CAR(GBBz)、第二代GPC3-CAR(G28BBz)及空载体Mock分别感染T淋巴细胞,制成Mock-T及GBBz-T、G28BBz-T,体外培养约28天达到一定数量后进行后续的治疗。
  4、GPC3-CAR对肝癌荷瘤小鼠的体内过继免疫治疗
  当肿瘤体积长到100~200mm3时,分别将HepG2和Sk-Hep-l小鼠荷瘤模型,随机分为4组(n=5):无菌盐水组,Mock-T组,GBBz-T和G28BBz-T,每只小鼠尾静脉注射8×106个T细胞,进行肝癌荷瘤小鼠体内过继免疫治疗。
  5、观察肝癌荷瘤小鼠的生存情况及肿瘤的生长情况
  观察荷瘤小鼠精神,饮食,排便以及体重等一般生存情况,活体肿瘤生长情况及荷瘤小鼠生存情况,选择荷瘤小鼠CAR-T过继免疫疗法的时机,观察治疗前后以下指标的变化:①小鼠精神、饮食、排便以及体重等一般情况;②观察瘤体大小;③处死小鼠,取出瘤体以及肝脏,脾脏,心脏,肺,肾,脑等器官,观察重要器官的损伤以及炎症细胞浸润情况,评估GPC3-CAR T细胞对肝癌治疗的安全性。④瘤体石蜡切片进行CD3免疫组化染色观察CAR-T细胞在瘤体的迁移情况;⑤TUNEL凋亡试剂盒检测肿瘤细胞的凋亡情况。⑥取小鼠外周血,ELISA检测血清中细胞因子INF-γ和IL-2的分泌情况。
  结果:
  1、成功构建GPC3高表达HCC细胞HepG2和GPC3不表达的Sk-Hep-l的NOD/SCID小鼠肝癌荷瘤模型。注射肝癌细胞混悬液后约7d-10d后成瘤,HepG2成瘤率约为75%~90%,Sk-Hep-1成瘤率接近100%。
  2、经过第二代及第三代GPC3-CAR T治疗后,小鼠一般情况良好,体重呈波动性改变,荷瘤小鼠的肝脏,脾脏,心脏,肺,肾,脑等器官与对照组相比,各脏器组织镜下结构清晰完整,未见明显中性粒细胞及淋巴细胞浸润,无细胞坏死,无充血水肿及组织纤维化。
  3、高表达GPC3的HepG2组,经过第二代及第三代GPC3-CAR T治疗后,肿瘤体积与对照组相比有明显的缩小,重量减轻(**P<0.01),GBBz组与G28BBz组无明显差异(P>0.05),不表达GPC3的Sk-Hep-1组,各T细胞组之间肿瘤体积和重量均无明显差异(P>0.05)。
  4、CD3免疫组化观察肿瘤组织中T细胞的浸润,光镜发现,HepG2荷瘤小鼠的G28BBz组和GBBz组有较多量阳性细胞,5个高倍视野下阳性细胞数分别为170.8±8.7和132.8±12.8,高于Mock组10.2±4.3(**P<0.01)。
  5、TUNEL检测肿瘤细胞的凋亡情况,荧光显微镜下计数5个高倍视野下阳性细胞所占的百分比。HepG2荷瘤小鼠中,与对照组相比,GBBz组和G28BBz组凋亡细胞多(*P<0.05);GBBz组vs G28BBz组之间无明显差异(P=0.05254)。Sk-Hep-1组可见少量凋亡细胞,各T细胞组之间均无明显差异(P>0.05)。
  6、ELISA检测荷瘤小鼠血清中细胞因子INF-γ和IL-2的分泌情况。细胞因子IL-2和INF-γ在小鼠体内分泌水平极低,在HepG2组中,经GBBz和G28BBz修饰的T淋巴细胞过继治疗后均分泌较高水平的细胞因子(*P<0.05)。Sk-Hep-1组分泌IL-2及INF-γ的能力低,各组间无统计学差异(P>0.05)。
  结论:
  成功构建GPC3高表达和GPC3不表达的NOD/SCID小鼠肝癌荷瘤模型;经第二代和第三代GPC3-CAR修饰的T淋巴细胞过继免疫治疗后,对GPC3高表达的肝癌荷瘤小鼠有明显杀伤,对重要器官无明显的损伤,未见体内细胞因子风暴。提示第二代和第三代GPC3CAR-T细胞过继免疫疗法可作为肝癌的有效治疗手段。
  (已选择0条) 清除
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

万方选题

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部