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[硕士论文] 刘琪
食品加工与安全 山东农业大学 2019(学位年度)
摘要:研究桑树抗病关键蛋白基因的启动子及其活性,对阐明基因的功能与表达调控机制十分重要.利用Tail-PCR技术成功地从桑树叶片基因组DNA模板中扩增得到病程相关蛋白基因MuPR1-2的启动子,将之命名为MuPR1-2.利用PlantCARE软件分析pMuPR1-2的核苷酸序列,发现其具有多个转录起始所必需的顺式作用元件以及多种转录因子结合位点,另外还包含多种环境因子响应元件.构建由pMuPR1-2启动GUS基因表达的植物表达载体,通过农杆菌介导的烟草瞬时表达及GUS组织化学染色分析pMuPR1-2具有启动子的功能,证实烟草叶片接种Pst DC3000菌液后能驱动下游报告基因GUS表达,pMuPR1-2具有病原菌诱导表达活性.进一步构建pMuPR1-2稳定表达的转基因拟南芥植株,通过GUS组织化学染色与GUS荧光定量分析发现pMuPR1-2不仅具有病原真菌和细菌诱导表达活性,同时具有可被多种激素诱导表达的特性和组织表达特异性....
摘要:病程相关蛋白(pathogenesis-related proteins,PRs)是植物体内受病原物或其他环境因子胁迫而诱导表达的一类蛋白质,在植物抗病反应过程中起着非常重要的作用.在桑树叶片中扩增得到MuPR1-2基因(GenBank登录号:KC453994),该基因编码区全长609 bp,编码蛋白质含有202个氨基酸,具有一个典型的信号肽和PR蛋白结构域以及PR1蛋白所共有的α-β-α夹心结构.将MuPR1-2与绿色荧光蛋白基因gfp融合转入拟南芥,通过对转基因拟南芥根尖的显微结构观察,证明MuPR1-2蛋白定位于细胞壁或分泌到细胞间隙.转入MuPR1-2基因的拟南芥对丁香假单胞菌番茄致病变种(Pst DC3000)和灰霉菌具有较强的抵抗能力,表明MuPR1-2在植物防御功能中具有重要作用....
摘要:MLX56是一种分子质量为56 kD,对多种鳞翅目昆虫具有毒性的桑树韧皮部汁液蛋白.利用PCR技术从桑品种湖桑32号的桑树叶片中克隆了MLX56基因,命名为MaMLX56(GenBank登录号:JX432966).该基因编码区全长为1 203 bp,编码蛋白质含有400个氨基酸,有3个典型的保守结构域,具有信号肽序列,是一种分泌型蛋白质.将克隆得到的MaMLX56编码区片段插入植物表达载体pBI121,构建植物表达载体pBI121-MaMLX56,并转化拟南芥获得了转基因植株.转基因拟南芥分别接种甘蓝蚜(Brevicoryne brassicae)和丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv.Tomato DC3000,Pst DC3000)后,植株呈现出较强的抗虫性和抗Pst DC3000侵染能力,推测MaMLX56在桑树响应生物胁迫过程中具有重要作用....
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