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[专利] 发明专利 CN201810438172.5
扬州大学 2018-10-02
摘要:本发明涉及从芜菁柱头分离乳突细胞的方法,具体涉及植物组织酶解分离和获取完整具有活力的乳突细胞的方法,属于生物化学及细胞生物学领域。本发明主要采用了独创的酶解液首次分离出乳突细胞,步骤主要包括采集成熟柱头、柱头酶解液培养、涡旋震荡以及离心分离,获得完整的具有活力的乳突细胞,具有步骤简单、操作方便、耗时较短等优点,并且最终分离出的乳突细胞具有较高纯度,适合于乳突细胞的蛋白质组学和基因组学实验研究。
[专利] 发明专利 CN201710224701.7
扬州大学 2017-07-28
摘要:本发明公开了一种抑制种子赤霉素合成基因表达的方法。涉及互补链的设计、脱脂棉包裹的种子的培养,属于发育生物学及细胞生物学领域。使用互补链抑制梨种子赤霉素合成基因表达的方法,可以更好了解到缺少赤霉素对种子萌芽率的影响,更好的研究赤霉素对解除种子休眠的作用。方法较简便,易于操作和实际应用。可以广泛用于不同植物种子其他基因表达的抑制。
[专利] 发明专利 CN201710224946.X
扬州大学 2017-09-01
摘要:本发明公开了一种快速解除杜梨种子休眠的方法。涉及激素处理和催芽,属于植物生理和生产栽培领域。本发明通过去除种子的种皮,用脱脂棉包裹,再用赤霉素和葡萄糖的混合液处理去除种皮的种子,利用合适的外源激素以及脱脂棉的保湿性打破种子休眠。本方法具有步骤简单、损耗少、耗时较短等优点,解除休眠的效果好,发霉的种子较少,萌芽的种子可用于播种或后续实验。
[专利] 发明专利 CN201710224342.5
扬州大学 2017-10-20
摘要:本发明公开了一种抑制芸苔属植物花柱NADPH氧化酶基因表达的方法。利用已知的NADPH氧化酶基因(Genbank登陆号:XM_009114548.2)在其二级结构的可能结合位点处设计出互补核苷酸链,添加至培养基中。将芸苔属植物花柱放入培养基中培养4小时,让其充分吸收互补核苷酸链。提取花柱RNA,反转录成cDNA后,通过荧光定量PCR检测出花柱中NADPH氧化酶基因表达量显著减少,证明该互补核苷酸链可以抑制该基因表达。
[硕士论文] 刘正阳
园艺 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:在生产上,梨繁殖以营养繁殖为主,即先播种砧木种子,培育成苗,而后嫁接栽培品种。梨种子需要经过层积处理才能萌发,因此在层积处理前无法测定种子质量。而种子层积又需较长时间。如果种子质量不好,发芽率较低,或者层积过程中因水分或通气条件把握不好造成种子发生霉烂都将严重影响当年苗木生产。目前生产上还没有高效、快速打破梨种子休眠的有效方法。因此,开展梨种子休眠相关的研究将有助于建立快速解除种子休眠的方法。本论文以梨砧木豆梨种子为研究材料,采用液相色谱法、二硝基水杨酸比色法和紫外分光光度计法测定了豆梨种子休眠解除过程中蔗糖、淀粉、葡萄糖和果糖含量及蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶和α淀粉酶活性及相关基因表达变化情况,利用反义寡聚核苷酸技术揭示蔗糖合成酶及GA20氧化酶基因在豆梨种子休眠解除过程中的作用,具体结果如下:
  1.建立一种打破梨种子休眠的新方法。利用脱脂棉包裹种子,放置于培养皿中,于4℃低温层积,2~3天湿润脱脂棉一次。每隔10天统计种子萌发率。处理30天后,种子开始萌发,60天后种子萌发率为76.7%,已经完全打破休眠。表明该方法可以用于打破梨种子休眠。
  2.确定豆梨种子解除休眠过程中糖类物质及相关酶活性和基因表达量变化情况。豆梨种子解除休眠的过程中蔗糖和淀粉含量逐渐降低,而葡萄糖和果糖含量不断升高;降解蔗糖的蔗糖合成酶和降解淀粉的α淀粉酶的活性逐渐升高,而合成蔗糖的蔗糖磷酸合成酶的活性则不断降低;蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶和α淀粉酶基因的相对表达量都呈现先下降,然后迅速升高的趋势。表明蔗糖降解和葡萄糖合成与豆梨种子休眠解除以及种子萌发有密切关系。
  3.确定蔗糖合成酶在豆梨种子解除休眠过程中起重要作用。利用反义寡聚核苷酸技术抑制蔗糖合成酶表达后,种子萌发被明显抑制。与正常层积种子相比,反义链抑制处理后种子萌发率仅为20%,蔗糖、葡萄糖和果糖含量明显增高,蔗糖合成酶和α淀粉酶活性显著降低,蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶、GAI和ABI-3等8个与糖代谢及激素信号转导相关基因的相对表达量全都显著减少。表明蔗糖合成酶在豆梨种子解除休眠过程中发挥重要作用。
  4.确定GA20氧化酶基因调控蔗糖代谢和淀粉降解相关酶活性。利用反义寡聚核苷酸技术抑制赤霉素合成关键酶GA20氧化酶的表达。反义链抑制处理后种子几乎不能萌发,抑制效果比抑制蔗糖合成酶更显著,相比于正常层积的种子萌发率仅为1.1%。种子内积累大量的蔗糖、葡萄糖和果糖,蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶和α淀粉酶在内的三种酶活性及基因相对表达量全部显著降低,且ABA信号因子的表达量明显高于GA信号因子。表明GA20氧化酶基因与糖代谢相关酶活性调控密切相关。
[专利] 发明专利 CN201710224699.3
扬州大学 2017-07-25
摘要:本发明公开了一种解除种子休眠的方法。涉及种子吸胀、露白和萌芽,属于植物生理学和生产栽培领域。本发明通过前期浸泡种子,接着用脱脂棉包裹在种皮上,利用脱脂棉保湿性能好且通透性好的特点,再通过低温层积彻底打破梨种子休眠。本方法具有易于操作、步骤简单、便于观察等优点,打破休眠的效果好,且用脱脂棉包裹方便加入化学药剂和激素以研究它们对解除种子休眠的作用。
[专利] 发明专利 CN201510796193.0
扬州大学 2016-04-06
摘要:本发明是涉及一种快速测定脱氧核糖核酸甲基化率的方法,属于分子生物学及遗传学领域。本发明主要是采用了新的DNA序列检测方法。步骤主要包括引物和探针设计,重亚硫酸盐转化、序列扩增、探针杂交和探针检测(采用检测探针和竞争探针同时杂交提高检测精度)和DNA甲基化率确定,在效率上远远高于目前的方法,时间短,价格也便宜,具有广阔应用前景。
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