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摘要:血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是一种二聚体糖蛋白,能够诱导毛囊血管内皮细胞的增殖和迁移,调节毛囊周围毛细血管生成,进而影响毛囊的生长发育.已知cgVEGF164是绒山羊 VEGF-A基因的一种主要剪接变体,但cgVEGF164 基因是否具有调控毛囊生长发育的作用目前尚不清楚.为初步探究cgVEGF164 基因对毛囊生长的影响及其机制,本研究通过原核显微注射制备cgVEGF164 转基因过量表达小鼠.通过HE 染色法比较转基因小鼠和非转基因对照小鼠毛囊的直径和密度,利用Western Blot 检测小鼠背部皮肤中信号蛋白ERK1/2、AKT1、LEF1 的磷酸化水平.本研究成功获得5 只阳性cgVEGF164 转基因小鼠 (雌雄比为4:1,阳性率8.5%);与非转基因对照小鼠相比,转基因小鼠毛囊直径增大、密度增加;经检测转基因小鼠中ERK1/2、AKT1、LEF1 的磷酸化水平均上调.结果表明,cgVEGF164 基因具有促进小鼠毛囊生长的作用,推测该功能可能与cgVEGF164 影响ERK1/2、AKT1 和LEF1 等信号蛋白的磷酸化有关....
摘要:为研究谷氨酸发酵废菌体水解液用作培养基氮源的可行性,以蛋白质水解度和溶解度为衡量指标,采用化学、生物、物理以及这几种方法的联合处理,通过正交优化实验,得出了菌体蛋白水解的最佳工艺条件为化学-生物联合处理,在盐酸浓度3 mol·L-1、温度110℃、料液比1∶0.5、水解12h后使用酸性蛋白酶酶解,调节料液pH为4、酶底比2.5%、温度55℃、酶解8h,水解完成后蛋白质水解度达到47.18%,溶解度达到94.09%.在总氮相等的情况下,将水解液和酵母膏以不同的比例组合,替代正常发酵产γ-聚谷氨酸过程的氮源.结果表明谷氨酸发酵废菌体经过最佳工艺水解后,其水解液可以用作发酵产γ-聚谷氨酸的氮源....
摘要:成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGFs)是细胞间的多功能信号分子,调节生物体的多种生理功能.FGF21作为一种重要的调控因子,对毛囊发育及生长周期具有重要作用.为研究FGF21基因对毛囊发育及生长周期的影响及作用机制,本研究通过构建靶向敲除FGF21基因的载体,体外将Cas9 mRNA和gRNA显微注射到FVB小鼠受精卵中,在小鼠FGF21基因的第1外显子上造成移码突变,从而获得FGF21基因敲除(knock out,KO)小鼠.通过测序鉴定F0代小鼠基因型,共获得3只FGF21等位基因敲除小鼠(Fgf21-/-);qRT-PCR和Western blotting结果表明,在Fgf21-/-小鼠中未检测到FGF21 mRNA表达和FGF21蛋白表达;经脱毛再生及皮肤组织H&E染色发现,与野生型(wild type,WT)小鼠相比,Fgf21-/-小鼠体重降低、器官组织未出现异常变化、毛发生长速度减慢、毛囊的直径和毛发的密度均减小.本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了Fgf21-/-小鼠模型,为后续研究FGF21基因在毛囊发育及生长周期中的功能提供了更好的动物模型....
[硕士论文] 刘旭
动物学 内蒙古大学 2018(学位年度)
摘要:小鼠成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor21,Fgf21)作为一种重要的调控因子,对毛囊发育及生长周期具有重要作用。本实验室通过CRISPR-Cas9系统构建Fgf21基因敲除小鼠(Fgf21-/-),并通过实验证明Fgf21基因参与毛发生长速度及毛囊直径的调控作用。MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA,以碱基互补配对的方式识别靶mRNA,并根据互补程度的不同诱导沉默复合体降解或阻遏靶mRNA的翻译。最新研究发现,miRNA对毛囊发育调控有重要作用。Fgf21基因在生物化学和遗传学上与miRNA虽然存在一定联系,但是Fgf21、miRNA以及毛囊生长发育机制的相互作用关系尚待明确。
  1Fgf21-/-小鼠模型的繁育及表型分析
  利用不同杂合子互交、杂合子与纯合子正反交以及纯合子互交的方式进行Fgf21-/-小鼠模型的繁育,经过基因鉴定最终成功获得45只Fgf21-/-小鼠。表型分析发现,Fgf21-/-小鼠的产仔数目显著减少(p<0.05),产仔雌雄比例、产仔初生重,整体及雌雄体重生长变化等生理指标均无显著差异(p>0.05);通过表达谱分析,生理解剖学分析发现,与WT小鼠相比,Fgf21-/-小鼠的各组织内脏均正常,尤其是Fgf21高表达的胰脏组织并无异常;通过石蜡切片及H&E染色后进行的毛干数目统计发现,Fgf21-/-小鼠的毛干数目显著少于WT小鼠(p<0.05)。2Fgf21-/-小鼠表皮组织的miRNA测序
  以Fgf21-/-小鼠和WT小鼠表皮组织为材料,miRNA测序共检出1249个不同长度miRNAs。差异miRNA表达分析的数据统计发现,差异显著的miRNAs共134个(p<0.05),其中83个表达水平上调,51个下调;结合文献参考,从测序结果共筛选得到10个与毛囊生长发育调控相关的miRNAs,分别为miR-377-3p、miR-335-5p、miR-214-5p、miR-148a-3p、miR-410-3p、miR-411-5p、miR-376b-3p、miR-376c-3p、miR-136、miR-221-3p,之后利用荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,RT-qRCR)进行验证,与测序结果相一致。
  3miRNA靶基因预测及生物信息学分析
  利用TargetScan、miRanda两款软件对显著性差异的134个miRNAs(p<0.05)分别进行靶基因预测后取其交集共得到105,886,298个靶基因。对显著差异miRNA的靶基因进行GO和KEGG富集性分析,最终GO功能注释共得到20,557个靶基因,KEGG注释得到7,881个靶基因。通过GO富集性分析发现有1023个差异显著(p<0.05)的基因功能属性,其中主要参与Protein binding、nucleus、integral component of membrane、cytoplasm和biological-process的5个功能属性过程;KEGG注释发现202条显著差异(p<0.05)的信号通路被富集,其中164条信号通路差异极显著(p<0.01),同时发现与毛囊发育相关的PI3K-AKT signaling pathway、P53signaling pathway、Notch signaling pathway、TGF-beta signaling pathway、TNF signaling pathway5条差异极显著(p<0.01)的信号通路。最终利用Cytoscape软件分别构建得到以验证成功的10个显著差异miRNAs为核心,集中调控与预测到的与毛囊发育调控相关靶基因的GO/KEGG-miRNA-靶基因的关联图。
  以上结果中异常表达的miRNA可能参与了Fgf21对毛囊发育的调控。同时上述结果为梳理Fgf21、差异miRNA、靶基因在毛囊生长发育中的相互作用及其关系提供实验数据。
[硕士论文] 刘旭
环境工程 内蒙古大学 2018(学位年度)
摘要:谷氨酸发酵废菌体是味精生产过程中的副产物之一,全国每年产生含有粗蛋白70%左右的菌体可达上百万吨。以往这些菌体蛋白主要通过废水排放到江河中,这既造成了严重的环境污染又浪费了蛋白资源。
  为研究谷氨酸发酵废菌体水解液用作培养基氮源的可行性,以蛋白质水解度和溶解度为衡量指标,采用化学、生物、物理以及这几种方法的联合处理,通过正交优化实验,得出了菌体蛋白水解的最佳工艺条件为化学-生物联合处理,在盐酸浓度3mol·L-1、温度110℃、料液比1:0.5、水解12h后使用酸性蛋白酶酶解,调节料液pH为4、酶底比2.5%、温度55℃、酶解8h,水解完成后蛋白质水解度达到47.18%,溶解度达到94.09%。在总氮相等的情况下,将水解液和酵母膏以不同的比例组合,替代正常发酵产γ-聚谷氨酸过程的氮源。结果表明谷氨酸发酵废菌体经过最佳工艺水解后,其水解液可以用作发酵产γ-聚谷氨酸的氮源。
[成果] 1500250034 陕西
S814 基础研究 农业科学研究与试验发展 公布年份:2014
成果简介:针对牛羊业发展的关键问题,该项目开展了牛羊胚胎规模化生产技术、体细胞高效克隆技术和基因工程育种技术的研究和应用,取得如下创新性成果。1.首次报道通过转染0CT4、SOX2、KLF4、MYC、LIN28和NANOG基因将牛胎儿成纤维细胞诱导成iPS细胞系;发现了TCF7、DGCR8和SENP7等19个基因的克隆囊胚表达谱可作为判定细胞供核能力的标准,建立了细胞供核能力评估技术,文献检索尚未见同类研究报道;研制出优质卵母细胞筛选方法、高质量克隆胚的表观修饰方法和体外培养体系,创立了牛羊体细胞高效克隆技术,牛羊体细胞克隆胚受体产犊(羔)率分别达到20.36%和38.2%,显著高于国内外已有报道(受体牛产犊率15.8%,受体羊产羔率18.9%);应用该技术鉴定和保存了81个家系835头(只)良种牛羊的体细胞,创制了38个牛羊的永生化细胞系,创建了良种牛羊的细胞资源库;克隆顶级种公牛和种母牛683头、种公羊和种母羊112头,创制对乳腺炎非易感的高产奶牛226头,将体细胞克隆技术发展到应用水平。2.研究了不同品种、繁殖状况、饲养方式、营养状态、养殖区域、季节和处理方案对牛羊体内胚规模化生产和移植的影响,建立了一套高效的牛羊体内胚规模化生产技术;将活体采卵技术与体外受精技术结合,建立了精卵遗传背景清晰的奶牛胚胎体外生产技术;发展了环介导恒温扩增技术,发明了牛胚胎性别鉴定简易方法;将胚胎性别鉴定技术分别与奶牛胚胎体内生产技术、活体采卵-体外受精技术优化集成,建立了良种奶牛性控胚胎生产技术体系;应用上述技术,在全国推广良种牛冷冻体内胚35689枚,受体妊娠率达到50.03%,推广良种羊体内胚35879枚,受体妊娠率达到62%,该研究推广良种牛羊体内胚的规模和胚移成功率均超过国内外已有报道(移植牛冻胚1万枚,受体妊娠率为45%;移植羊胚5929枚,受体妊娠率为58.9%);推广性别鉴定体内胚、体外胚和性控精液体外受精胚30004枚,胚胎性别鉴定准确率为99.9%,文献检索尚未发现规模化推广性别鉴定体外胚和性控精液体外受精胚的报道。3.将体细胞克隆技术应用于动物分子育种领域,创建了牛羊基因工程育种技术;首次报道通过基因组位点精确敲除和插入获得基因打靶克隆牛和外源基因定点整合克隆牛;首次报道,应用体细胞克隆技术,创制了分别表达人β防御素3基因、人溶菌酶基因、溶葡萄球菌素基因的抗乳腺炎克隆奶牛和奶山羊育种材料5个和富含多不饱和脂肪酸克隆奶牛育种材料1个,为培育优质抗病牛羊新品种奠定了基础。该项目获国家发明专利13项,在Nature Communications、Cell Research和Stem Cells等学术刊物发表SCI论文95篇,在国际上产生了重要影响。该项目创新和发展了牛羊良种繁育关键技术,通过推广应用,在全国形成技术辐射和良种辐射,对提升牛羊种质创新和良种繁育水平,推动中国优质高效畜牧业发展发挥了重要作用,创造直接经济效益21亿多元,并在实际应用中带动了中国动物繁育生物技术的发展,产生了显著的社会效益和国际影响力。
[成果] hg06031368 内蒙古
S157 基础研究 农业服务业 公布年份:2002
成果简介:“北部多沙丘陵区(准格尔)风蚀水蚀防治与农牧业综合开发研究”开展出了以林草措施为主综合治理砒砂岩区的水土流失和以林草和秸秆资源转化为主发展舍饲畜牧业的攻关研究。经过5年的攻关研究,形成了一整套适用技术,并采用试验、示范和推广紧密结合的技术路线应用配套技术,使准格尔试区的人均收入达到2528元,粮食单产达到275kg/亩,人均粮食达到875kg,比“八五”分别增加了903元、57kg/亩和281kg。在砒砂岩集中分布的伊克昭盟累积推广面积4200km2,新增粮食5400kg,新增产值2.2亿元,有力地推动了当地的水土保持生态建设和农牧业发展。
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