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摘要:目的 探讨HaCaT细胞中瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)的光控作用及其机制.方法 培养的HaCaT细胞分为225 mJ/cm2 UVA刺激组和25 mJ/cm2UVB刺激组,UVA刺激组分为空白对照组(仅有HaCaT细胞)、视黄醛组、UVA组、视黄醛+UVA组(UVA-TRPA1对照组)、视黄醛+UVA+肉桂醛组(UVA-TRPA1激动组)、视黄醛+UVA+樟脑组(UVA-TRPA1抑制组);UVB刺激组分为空白对照组(仅有HaCaT细胞)、视黄醛组、UVB组、视黄醛+UVB组(UVB-TRPA1对照组)、视黄醛+ UVB+肉桂醛组(UVB-TRPA1激动组)、视黄醛+UVB+樟脑组(UVB-TRPA1抑制组).qPCR、Western印迹检测HaCaT细胞中TRPA1的表达.流式细胞仪检测各组HaCaT细胞钙离子内流的变化.结果 qPCR和Western印迹显示,HaCaT细胞中有TRPA1 mRNA及蛋白的表达.UVA作用后空白对照组、视黄醛组、UVA组、视黄醛+UVA组荧光强度分别为155.06±7.62、148.37±18.77、166.92±3.71、331.333±40.563,组间差异有统计学意义(F=44.509,P<0.01).UVB作用后空白对照组、视黄醛组、UVB组、视黄醛+UVB组荧光强度分别为150.20±1.73、171.66±56.23、147.56±6.60、250.44±9.13,组间差异有统计学意义(F=85.261,P< 0.01),视黄醛+UVA/UVB组荧光强度均高于空白对照组(q值分别为18.442、6.052,P<0.01).TRPA1激动剂和拮抗剂可调节UVA、UVB所引起的钙离子内流的变化(P< 0.001),在UVA、UVB作用下,TRPA1激动剂组荧光强度均高于对照组(q值分别为14.934、32.770,P<0.001),TRPA1抑制剂组荧光强度均低于对照组(q值分别为7.986、14.596,P<0.001).结论 TRPA1在皮肤HaCaT细胞中有表达,UVA或UVB可通过TRPA1调控HaCaT细胞的钙离子内流....
摘要:目的 体外诱导角质形成细胞凋亡并研究人参皂甙对细胞凋亡的影响.方法 将IFN-γ,Anti Fas Ab作用于体外培养角质形成细胞HaCaT诱导细胞凋亡,并检测人参皂甙对细胞凋亡的影响.结果 50 ng/mL IFN-γ和25 ng/mL Anti Fas Ab共同作用可以诱导21.5%角质形成细胞HaCaT凋亡.8种人参皂甙中,Mx,CK和Re可逆转Anti Fas Ab诱导的HaCaT细胞凋亡,逆转率分别为18.4%,14.5%和9.6%.结论 IFN-γ和Anti Fas Ab共同作用可诱导HaCaT细胞凋亡.人参皂甙Mx,CK和Re对Anti Fas Ab诱导的HaCaT细胞凋亡有一定的抑制作用....
摘要:目的:复方甘草酸苷(美能)用于治疗特应性皮炎,观察复方甘草酸苷对IgE介导的小鼠皮炎动物模型的作用.方法:特应性皮炎患者84例,美能加皿治林片口服,对照组皿治林口服.以卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导小鼠特应性皮炎为动物模型,研究美能对其血清IgE、腹部真皮炎症细胞浸润和血清某些细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的影响.结果:临床观察显示84例患者口服皿治林加美能后与对照组相比,对特应性皮炎的疗效具有显著性差异.实验结果显示美能抑制血清IgE、真皮炎性细胞浸润、血清IL-4,上调IFN-γ,对IL-2无明显影响.结论:复方甘草酸苷对特应性皮炎具有抗炎、抗过敏作用....
摘要:目的研究中药乙醇提取物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响.方法以MTT法测定培养的B16黑素瘤细胞的增殖活性;NaOH法测定黑素生成量;体外氧化多巴反应方法测定酪氨酸酶活性.结果与空白对照组相比,18种中药乙醇提取物中,有9种提取物对1种以上指标有显著性作用(P<0.05或P<0.01).沙苑子、甘草、山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、黄芩、黑芝麻、墨旱莲可明显促进B16黑素瘤细胞增殖,甘草、山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、何首乌、黑芝麻、墨旱莲明显增加黑素含量,山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、黑芝麻、墨旱莲明显增加酪氨酸酶活性,山慈姑、薄荷、苦参、夏枯草、黑芝麻和墨旱莲的提取物对3种指标均有显著性作用(P<0.05或P<0.01).结论山慈姑等6种中药的乙醇提取物具有促进黑素细胞增殖和合成黑素的作用....
摘要:目的选择离体实验中对黑色素合成的关键酶-酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)有激活作用的墨旱莲(旱莲草),研究其动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成及相关基因[TYR、TYR相关蛋白(TRP-1/2)mRNA]表达的影响.方法以棕色豚鼠为动物模型,用Schmorl法染色,计数含黑素的细胞;用多巴(DOPA)-氧化酶染色,计算每100个基底细胞中DOPA阳性细胞数.培养的小鼠B16黑素瘤细胞以四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、氢氧化钠(NaOH)法和体外氧化DOPA反应方法分别测定细胞的增殖活性、黑素生成量及TYR活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TYR及其TRP-1/2基因的表达.结果墨旱莲乙醇提取物可使豚鼠表皮基底层中含黑素颗粒细胞增多,使豚鼠表皮内DOPA阳性细胞增多(P<0.05);具有促进小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及TYR活性作用(P<0.05),对细胞TYR基因有上调作用,而对TRP-1/2 mRNA的表达无明显作用.结论墨旱莲乙醇提取物具有促进黑素合成及上调酪氨酸酶基因表达的作用,对白癜风色素恢复有较好应用和开发的前景....
摘要:[目的]选择对酪氨酸酶有激活作用及对动物致色素作用较强的中药组成方剂,观察口服中药复方治疗白癜风的临床疗效.[方法]102例门诊白癜风患者,随机分成两组:白蚀丸对照组52例,口服白蚀丸,每次2.5 g, 3次/d;中药方剂组50例,中药方剂水煎服,1剂/d,分早晚服,两组均2个月为1疗程,治疗2个月后判定疗效.[结果]中药方剂组50例患者中痊愈4例(8%),显效15例(30%),有效16例(32%),无效15例(30%),显效率38%,总有效率70%;白蚀丸组52例患者中痊愈1例(1.9%),显效9例(17.3%),有效13例(25%),无效29例(55.8%),显效率19.23%,总有效率44.23%.中药方剂组疗效优于白蚀丸组,两组显效率及总有效率相比均有显著性差异.[结论]选择对酪氨酸酶有激活作用及对动物致色素作用较强的中药治疗白癜风具有较好疗效....
[硕士论文] 刘影
皮肤病与性病学 大连医科大学 2018(学位年度)
摘要:背景:
  众所周知紫外线为黄褐斑等色素沉着性皮肤病的主要病因之一,亦是白癜风等色素脱失性皮肤黏膜疾病发病的诱因及治疗手段之一。紫外线暴露后的治疗策略多集中于黑素细胞增殖及黑素合成等中下游环节,而针对其始动环节的靶向治疗较少。
  瞬时受体电位锚蛋白1(Transient Receptor Potential Ankyrin1,TRPA1)作为一种非选择性钙离子渗透型通道参与细胞的多种生命活动。近年来有研究表明在表皮黑素细胞中,紫外线激活TRPA1通道增加细胞内钙离子内流,促进早期的黑素合成。Bellono等研究团队提出了TRPA1可能是唯一的眼外光转导通路的理论。在表皮细胞中,黑素细胞产生的黑素并通过吞噬向角质形成细胞转运。此外,研究表明钙离子在细胞吞噬的过程中起着重要的作用。因此研究TRPA1光转导通路在表皮角质形成细胞中的作用及其机制,对于深入了解紫外线相关色素障碍性皮肤病发病机制及调节黑素小体转运的上游机制具有重要意义。
  目的:
  1.明确瞬时受体电位锚蛋白l在角质形成细胞中的光转导作用。
  2.探讨瞬时受体电位锚蛋白1对角质形成细胞吞噬功能的影响。
  方法:
  1.琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,qPCR)检测人永生化角质形成细胞系(HaCaT细胞)有TRPA1基因的表达。
  2.Western Blot法检测HaCaT细胞中TRPA1蛋白的表达。
  3.流式细胞仪检测到UVA、UVB照射后,HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子的内流,以及激动或拮抗TRPA1后,HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子的内流。
  4.激光共聚焦显微技术检测UVA、UVB照射后,TRPA1通道对HaCaT细胞吞噬功能的影响。
  结果:
  1.琼脂糖凝胶电泳、qPCR和Western Blot检测到HaCaT细胞中有TRPA1基因及蛋白的表达。
  2.在UVA或者UVB的照射下,流式细胞仪检测HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子的内流显著增高。
  3.流式细胞仪检测激动TRPA1通道HaCaT细胞钙离子的内流显著增高,在UVA或者UVB的照射下,拮抗TRPA1通道HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子的内流显著降低。
  4.流式细胞仪检测激动TRPA1通道HaCaT细胞吞噬荧光微球的数量显著增多,在UVA或者UVB的照射下,拮抗TRPA1通道HaCaT细胞吞噬荧光微球的数量显著减少。
  5.激光共聚焦显微镜观察激动TRPA1通道HaCaT细胞吞噬荧光微球的数量显著增多,在UVA或者UVB的照射下,拮抗TRPA1通道HaCaT细胞吞噬荧光微球的数量显著减少。
  结论:
  1.UVA及UVB均通过激活TRPA1通道,诱导HaCaT细胞视黄醛依赖性钙离子内流,即TRPA1通路在角质形成细胞中具有光转导作用。
  2.UVA及UVB均通过TRPA1通路增强HaCaT细胞的细胞吞噬功能。
[硕士论文] 刘影
口腔医学 大连医科大学 2017(学位年度)
摘要:目的:探讨和评价诊断蜡型和硅橡胶导板联合应用于前牙全冠美学修复治疗的临床效果。
  材料与方法:收集2016年1月至2017年1月于大连医科大学附属口腔医院修复科就诊的有前牙全冠美学修复需求的病例共8例,其中包括四环素牙、牙釉质缺损、前牙排列不齐、重度深覆牙合、深覆盖且不接受正畸治疗的患者,男性4例,女性4例。
  根据初步的修复方案、口内牙体情况以及医患交流获得的信息,在研究模型上进行牙体组织的初步预备。然后按照设计方案制作诊断蜡型,蜡型的形态、厚度应该完全模仿最终修复体的制作过程,以免防止最终修复体和诊断蜡型之间产生较大的误差。医生利用此诊断蜡型与患者进行沟通,并可以根据自己的专业知识结合患者个人对美学的要求对蜡型进行调整,达到医患均满意的效果后,使用高强度加聚硅橡胶重体材料制作硅橡胶导板,之后于硅橡胶导板上施画切割线,并沿切割线完成切割后备用。
  在进行口内牙体预备过程中,将切割完成的各硅橡胶导板分别带入口内,确认和控制牙体组织的预备量。最终对完成后的预备体表面抛光,排龈取模,灌注超硬石膏模型,连同诊断蜡型及按照正确比色方法获得的比色结果一起送至技工室,完成最终修复体的制作。借助利用诊断蜡型制作的硅橡胶导板,以自凝树脂制作临时修复体。待最终修复体完成之后,于患者口内试戴,经有效调改后进行最终修复体的粘结,完成最终的美学修复。
  研究中所选取的8个病例均于修复治疗前,根据其患者的要求,于研究模型上制作诊断蜡型,经与患者沟通获得认可后,借助此诊断蜡型制作硅橡胶导板,指导口内牙体组织的预备,以最终获得与诊断蜡型相近的美学修复体。本研究主要从诊断蜡型与硅橡胶导板的制作、患者美学意见的采集、口内牙体预备的精确性、最终修复体的满意度等方面评价诊断蜡型和硅橡胶导板联合应用的临床效果。
  结果:在联合应用诊断蜡型和硅橡胶导板进行前牙全冠美学修复的8个病例中,完成最终修复时及修复后3-6个月随访时,患者均对参照诊断蜡型所恢复的修复体形态表示满意,达到了预期的美观效果;在最终修复体的颜色呈现方面,除1例在试戴最终修复体时出现配色问题经修改后满意外,其余均达到了患者满意的结果。
  结论:诊断蜡型可直观反映最终修复的预期效果,便于医患、医技之间针对修复治疗效果的交流与沟通,利于评估治疗方案的可行性及完善临床治疗方案。硅橡胶导板可精确的指导临床医生完成口内牙体预备操作,在较大程度上可将诊断蜡型的修复效果转移至最终修复体上,达到预期的美学修复效果。诊断蜡型与硅橡胶导板的联合应用,可极大地提高美学修复效果,患者满意度高,在前牙全冠美学修复中具有至关重要的临床意义。
摘要:湿疹样皮炎包括湿疹、特应性皮炎(AD),是常见的皮肤病之一,伴有剧烈瘙痒且易复发,对患者生活质量影响大,且其发病率随经济发展而上升。甘草酸苷具有抗炎、抗过敏作用,本文利用国外研究异位性皮炎新的进展,采用两种动物模型进行实验,观察甘草酸苷对IgE介导的皮炎动物模型和DNFB变应性接触性皮炎(ACD)动物模型的抑制作用,为临床上应用甘草酸苷治疗湿疹样皮炎提供科学依据。同时观察复方甘草酸苷治疗湿疹、特应性皮炎的临床疗效。
[硕士论文] 刘影
皮肤病与性病学 大连医科大学 2006(学位年度)
摘要:最近的研究表明角质形成细胞的凋亡在湿疹性皮炎慢性化中起着关键的作用。角质形成细胞的凋亡导致细胞间连接的破坏,真皮内水分渗入表皮内,在表皮内形成海绵样病变,这可以使皮肤的屏障功能受到损害,从而加重湿疹性皮炎。因此,角质形成细胞的凋亡为湿疹性皮炎慢性化的转折点,阻断角质形成细胞的凋亡可以减轻湿疹慢性化进程的发生,从而为湿疹性皮炎的治疗提供了一条新的途径,成为药物筛选的一个新靶点。流式细胞仪可以定量检测细胞的凋亡,此方法虽然敏感准确,但是需要一定量的细胞和大量的试剂,并且操作复杂、耗时,不适合用于高通量的药物筛选。SulphorhodamineB(SRB)和Microtetrazolium(MTT)方法是检测细胞增殖情况的快速、简便的96孔板检测方法,如果能区分出细胞的增殖抑制是由凋亡而不是坏死引起的,就可用此方法初步筛选抑制细胞凋亡的药物。本实验中用干扰素-γ(IFN-γ)和抗Fas单克隆抗体(antiFasAb)共同作用诱导角质形成细胞HaCaT凋亡,部分模拟湿疹性皮炎的发病机制,以用于筛选治疗湿疹性皮炎的药物。通过比较SRB和MTT两种检测方法选用更敏感、准确的SRB方法以及用流式细胞仪同步监测SRB检测结果,建立了用SRB初步筛选抗细胞凋亡药物的方法,从而为筛选湿疹性皮炎的治疗药物奠定了实验基础。 方法:IFN-γ和antiFasAb单独或联合作用于体外培养的角质形成细胞株HaCaT,流式细胞仪检测细胞表面Fas抗原的表达和细胞的凋亡情况并检测caspase抑制剂z-VAD-FMK对HaCaT细胞凋亡的影响。比较SRB和MTT方法在线性、日内变异及日间变异上的差异,选用更精确的方法检测HaCaT细胞的增殖情况。流式细胞仪同步检测SRB方法的检测结果,以确定用SRB方法筛选抑制角质形成细胞HaCaT凋亡的人参皂甙。 结果:(1)流式细胞仪检测结果显示IFN-γ浓度分别为0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml时,HaCaT细胞表面的Fas抗原表达分别49.66﹪±6.90、63.54﹪±6.38、71.41﹪±6.03、77.58﹪±5.92、79.31﹪±4.80。1ng/ml的IFN-γ上调Fas表达不明显(P>0.05),但是10ng/ml以上浓度的IFN-γ可显著增加Fas表达(P<0.05)。(2)流式细胞仪检测结果显示50ng/ml的IFN-γ和25ng/ml的antiFasAb共同作用可以诱导角质形成细胞HaCaT凋亡,凋亡率可达到21.5﹪。Caspase抑制剂z-VAD-FMK可有效抑制IFN-γ和antiFasAb共同作用引起的HaCaT细胞凋亡。(3)SRB方法和MTT方法都有非常好的线性,相关系数分别为0.99896和0.99724,两种方法间无显著性差异。SRB和MTT方法在日内变异上无显著性差异,而在日间变异上SRB方法小于MTT方法,两种方法间有显著性差异。(4)流式细胞仪与SRB方法同步检测结果表明,固定IFN-γ浓度为50ng/ml,添加antiFasAb25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、0.5μg/ml、1μg/ml时,流式细胞仪检测的细胞凋亡率分别为25.39﹪、24.39﹪、28.4﹪、31.58﹪、40.52﹪、46.67﹪,而SRB方法检测的细胞增殖抑制率分别为29.8﹪、30.69﹪、32.79﹪、36.83、43.69、47.19﹪,两种方法检测结果的相关系数为0.9934,应用两组间t检验,P>0.05,在统计学上无显著性差异。(5)人参皂甙Mx、CK和Re对HaCaT细胞凋亡有一定的抑制作用,抑制率分别为18.4﹪、14.5﹪、9.6﹪。 结论:(1)IFN-γ和antiFasAb共同作用可诱导角质形成细胞HaCaT凋亡。(2)SRB方法比MTT方法更灵敏、更稳定,更适合药物的高通量筛选。(3)流式细胞仪与SRB方法同步检测结果显示,在明确细胞的增殖抑制是由凋亡而非坏死引起时,SRB方法可以用于凋亡的定量检测,即SRB方法可用于初步筛选抑制细胞凋亡的药物。(4)人参皂甙Mx,CK,和Re对IFN-γ和antiFasAb诱导的HaCaT细胞凋亡有一定的抑制作用。
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