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[硕士论文] 刘婧
化学工程 中国石油大学(华东) 2012(学位年度)
摘要:卵黄高磷蛋白(Phosvitin,PV)是已知蛋白质中磷酸化程度最高的一种蛋白质,它能够促进金属离子的吸收,具有较高的热稳定性、抗氧化性、乳化性及杀菌作用,广泛应用于食品、医药等行业。
   本论文研究了一种从鸡蛋黄中分离卵黄高磷蛋白的新型提取工艺,避免了使用有机溶剂及多价金属离子。基于蛋黄中不同蛋白质的性质(尤其是溶解性及热稳定性)不同,新型生物分离过程主要包括NaCl溶解、热处理和透析。通过实验考察了影响卵黄高磷蛋白纯度的关键工艺参数,最佳分离条件为:0.17 M NaCl溶液稀释蛋黄;0.5 M NaCl溶液溶解沉淀;加热温度80℃,加热时间30 min;离心力6000×g;4℃下对蒸馏水透析24 h。在最优条件下,卵黄高磷蛋白的回收率为87.1%,N/P值为2.8±0.2。
   提取的卵黄高磷蛋白产品的等电点为4.0-4.2。SDS-PAGE分析结果显示,卵黄高磷蛋白的分子量约为35 kDa;Native-PAGE分析结果显示,它由α和β两种卵黄高磷蛋白构成,本实验得到的产品主要成分为α-卵黄高磷蛋白。卵黄高磷蛋白产品在pH2.0时,β折叠约占78.5%;在pH7.0时,α螺旋约占36%,β折叠约占28%,无规则卷曲约占36%,均与文献数值吻合。这表明,纯化的卵黄高磷蛋白以合理的二级结构折叠。
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