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[期刊论文] 余程 刘妍 王胜军 汪文俊
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CSTPCD 北大核心
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摘要:本试验旨在研究黄曲霉毒素B1(AFB1)对肉鸡原代肝脏细胞线粒体氧化磷酸化、线粒体膜电位、活性氧(ROS)、细胞凋亡、抗氧化酶及其相关基因表达的影响.选取18~20日龄健康爱拔益加(AA)肉鸡分离的肉鸡原代肝脏细胞(BPHs),分为3个处理组,每个处理组5个重复,试验组分别添加1μmol/L和2μmol/L的AFB1,对照组添加等量的DMSO.结果表明:随着AFB1浓度的升高,线粒体Ⅲ和Ⅳ呼吸作用显著增强(P<0.05),而线粒体呼吸控制率却显著下降(P<0.05);随着AFB1浓度的升高,线粒体电位下降,并呈现浓度依赖型模式,当AFB1为2.5μmol/L时BPHs线粒体电位显著下降(P<0.05);AFB1极显著引发了ROS的产生(P<0.01);高浓度的AFB1(2.5μmol/L)处理使得BPHs细胞凋亡率明显上升(P<0.05)以及caspase-3、caspase-9表达明显增加(P<0.05);AFB1显著提高了Nrf2的mRNA表达水平(P<0.05);与对照组相比,HO-1、SOD的mRNA表达量显著下降(P<0.05);高浓度的AFB1(2.5μmol/L)显著提高了NQO1的mRNA表达水平(P<0.05).以上研究结果显示,AFB1使线粒体氧化磷酸化过程解偶联,线粒体膜电位下降,ROS大量产生,抗氧化酶活力降低,细胞发生凋亡,抗氧化酶相关基因mRNA表达下降,而Nrf2基因mRNA表达增强.AFB1导致胞内ROS上升引发氧化应激,可能与Nrf2信号通路有关....
摘要:本实验旨在研究RNA干扰(RNAi) RACK1基因对C2C12成肌细胞中肌分化标志基因MHC和MyoG表达的影响.将人工合成的靶向RAKC1基因的3条siRNA(1,2,3)转染C2C12细胞,用RT-qPCR方法检测并筛选干扰效率最高的1条siRNA.将筛选出的siRNA转染C2C12成肌细胞并诱导细胞分化,通过RT-qPCR、Western blot和免疫荧光方法在mRNA及蛋白水平检测RACK1基因沉默后对MHC和MyoG表达的影响.此外,Western blot方法检测RACK1基因沉默后对PI3K/Akt和Erk/MAPK通路激活的影响.结果表明:RACK1-siRNA-2干扰效率最高,转染48 h后抑制率可达70%.随后,C2C12细胞转染siRNA-2,诱导分化48h后RT-qPCR表明,MHC和MyoG的mRNA表达均显著性下调(P<0.05);诱导分化72 h后,Western blot和免疫荧光结果表明MHC和MyoG的蛋白表达明显低于对照组,但AKT和Erk磷酸化水平未见明显变化.上述结果表明,干扰RACK1能显著抑制MHC和MyoG的表达,提示RACK1正向调控C2C12成肌细胞的分化....
[期刊论文] 张琳 刘妍 刘玉兰 张晶
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CSTPCD 北大核心
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摘要:本试验旨在研究二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)对体外培养的C2C12成肌细胞增殖和凋亡的影响.用不同终浓度DHA和EPA(0、6 25、12 5、25、50、100 μmol/L)分别作用C2C12细胞12、24、48 h后,用CCK-8法检测细胞的增殖情况;用不同终浓度DHA和EPA(0、50、100 μmol/L)分别作用C2C12细胞48 h后,用TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果表明:终浓度为50、100 μmol/L的EPA处理细胞48 h,C2C12细胞增殖能力受到显著抑制,但不同浓度DHA处理组细胞的增殖能力无明显变化.此外,EPA处理C2C12细胞后,TUNEL法显示凋亡细胞数增加,且100μmol/L的EPA处理组细胞凋亡最明显.然而,与对照相比,DHA处理组细胞无明显凋亡.上述结果表明,EPA能抑制C2C12成肌细胞增殖并促进其凋亡,而DHA对细胞增殖和凋亡无明显影响....
摘要:骨骼肌消耗是肌肉蛋白质合成减少和(或)分解代谢加快的结果,可发生于多种疾病状态下,如病原菌感染、创伤、肿瘤等。目前越来越多的研究结果表明系统性炎症在肌肉蛋白质降解过程中扮演着重要角色。作者综述了近年来关于炎症反应导致肌肉蛋白质降解机理的研究进展,主要包括泛素—蛋白酶体途径、自噬溶酶体降解途径及 PI3K/Akt、p38/MAPK、NF-κB 等多条信号通路,为开发新的方法治疗肌肉降解提供参考。...
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北大核心 CSTPCD CSCD CA CBST
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摘要:以C2C12肌管细胞为试验材料,探讨脂多糖(LPS)诱导的炎症反应对肌管蛋白降解相关基因及信号通路的影响.选取不同质量浓度(10、100、1 000 ng· mL-1)的LPS分别刺激C2C12肌管细胞30 min和3h,通过RTqPCR检测炎症因子TNF-α和IL-6的基因转录,确定LPS最佳刺激浓度以建立细胞炎症模型.用最佳浓度LPS分别刺激C2C12肌管细胞0min、30 min、1h、3h、6h、12 h、24 h,RT-qPCR检测MAFbx基因和MuRF基因在不同时间点的转录量变化.此外,1 000 ng·mL-1 LPS刺激C2C12肌管细胞12 h后,Western blot检测AKT/FOXO1、mTOR和P38信号通路相关蛋白质的表达情况.结果表明:LPS刺激C2C12肌管细胞的最佳浓度为1 000 ng·mL-1,在作用30 min和3h时均能显著上调TNF-α、IL-6的基因转录,而在刺激12和24 h时MuRF1、IL-1β、IL-6和TLR4的基因转录显著上调.此外,1 000 ng· mL-1 LPS刺激C2C12肌管细胞12 h时,仅AKT和FOXO1蛋白磷酸化水平明显降低.基于以上结果,推测LPS通过调控AKT/FOXO1信号通路诱导C2C12肌管细胞MuRF1转录....
摘要:为建立一种雄甾-4-烯-3,17-二酮(4-AD)快速而简便的测定方法,用乙酸乙酯-浓硫酸(15︰1, v/v)溶液溶解4-AD标准品,配成标准溶液,并稀释为一定的浓度梯度后加乙酸酐反应15 min,测定吸光度,绘制标准曲线,进行稳定性试验、加样回收率试验和精密度试验,并通过分光光度法检测分支杆菌转化植物甾醇所得转化液中4-AD含量,与高效液相法进行了比较.结果表明:4-AD在0.08~0.48 mg/mL的范围内呈良好线性关系,相关系数R2=0.9993,精密度RSD为0.672%,样品平均回收率为99.69%,分光光度法和高效液相方法检测结果差异不显著(p>0.05).故此法操作简单、快速,准确性高,重现性好....
[期刊论文] 刘妍 陈雪萍
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北大核心 CSSCI CASS
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摘要:我国现行立法仅规定了民事执行的内部监督,而内部监督不能有效遏制"民事执行乱"现象,因此,设立外部监督机制的"检察监督"实属必要.民事执行检察监督的范围包括监督执行中作出的裁定决定,监督执行行为;民事执行检察监督的程序包括启动主体、启动要件、管辖和审理程序....
摘要:在"一带一路"建设过程当中,必须对跨文化传播予以更大的关注,这不仅可以为"一带一路"建设中的决策提供良好的舆论支持,也会在很大的程度上促进命运共同体的构建.基于"一带一路"跨文化传播的创新研究目的、研究方法,展示了研究成果,对"一带一路"跨文化传播不断进行创新,以有利于中国企业"走出去",对于大众传播的影响力也会有所增强,进而促进"一带一路"建设....
[硕士论文] 刘妍
微生物学 中南民族大学 2016(学位年度)
摘要:肌肉作为机体内主要的代谢活动中心,是体内蛋白质最大的储备库,为多种器官(如心脏、肝和大脑)提供能量。在体内肌肉蛋白的合成和降解是一种动态平衡,其调控机制较为复杂。免疫应激诱导的炎症反应可以导致肌肉蛋白质的降解,但其具体机制尚未可知。本研究以分化的C2C12肌管细胞为研究对象,旨在探讨脂多糖(LPS)诱导的炎症反应导致肌管蛋白降解的作用,并且探讨二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)两种 n-3多不饱和脂肪酸(PUFA)是否能够对LPS诱导的肌肉蛋白降解有调控作用。
  本研究首先选取不同浓度(10 ng/mL、100 ng/mL、1000 ng/mL)LPS刺激C2C12肌管细胞,采用RT-PCR方法检测炎性细胞因子TNF-α和IL-6的表达,确定 LPS最佳刺激浓度并建立稳定的免疫应激模型。采用最佳浓度1000 ng/mL LPS刺激 C2C12肌管细胞0 min、30 min、1 h、3 h、6 h、12 h和24 h,检测肌肉蛋白质降解标志基因 MAFbx和 MuRF1在此时间点的表达量,结果显示在刺激12 h和24 h时 MuRF1、IL-1β和 TLR4的表达显著上调(P<0.05)。利用 Western blot方法检测LPS刺激 C2C12肌管细胞12 h后Akt/Foxo、mTOR和P38信号通路相关蛋白的表达情况,发现仅 Akt和 Foxo1蛋白磷酸化水平明显降低。研究了添加营养素 EPA和 DHA对 LPS诱导的炎症反应引起的肌肉蛋白质降解的调控作用,结果显示EPA组和 DHA组与 LPS组相比, TNF-α、IL-1β和 IL-6的基因表达显著降低(P<0.05), NF-κB的表达受到显著抑制。然而, EPA和DHA对 LPS引起的MuRF1表达显著上调无明显抑制作用。发现 EPA和DHA组的Akt磷酸化水平与 LPS组相比无明显差异,说明 EPA和 DHA 可能对 Akt信号通路未产生影响,因而对 MuRF1上调表达无明显的抑制作用。肌肉萎缩是指当蛋白质降解超过蛋白合成时,会导致肌纤维的横截面减小和肌力减退。长期营养不良、严重烧伤、老化以及各种慢性疾病会引发肌肉萎缩。因此,肌肉萎缩会导致生活质量的下降,提高患者的发病率和死亡率。通过探讨免疫应激诱导的炎症反应导致肌管蛋白降解的分子机制,旨在为缓解肌肉蛋白质降解提供有效的预防手段及理论基础。
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