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摘要:目的 为了研究肌萎缩侧索硬化症致病机理和药物研发,建立第4腰椎腹侧神经根牵拉大鼠模型,并用脑源性神经营养因子作为阳性药物进行模型的有效性验证.方法 首先对5只SD雄性大鼠进行手术,一周后用抗胆碱乙酰转移酶抗体进行免疫组织化学染色观察脊髓前角运动神经元数量的变化;预实验证明手术模型成功后,将40只7周龄SD雄性大鼠随机分为四组,两组模型对照组及两个脑源性神经营养因子治疗组(手术后立刻预防性给药组和手术后一周治疗性给药组).使用抗胆碱乙酰转移酶免疫组织化学染色观察运动神经元数量的变化.结果 大鼠手术后恢复良好,临床观察无异常.染色结果证明手术牵拉后,造成明显的脊髓前角运动神经元变性死亡.与对照组相比,用脑源性神经营养因子治疗的神经根牵拉动物,不管是预防性给药还是手术1周后再进行治疗性给药都达到了良好的治疗效果,胆碱乙酰转移酶染色阳性神经元细胞数量显著增加(P<0.0001),结果分别为17.85%比93.06%;26.6%比87.27%.结论 成功的建立大鼠第4腰椎腹侧神经根牵拉模型,为肌萎缩侧索硬化症的研究提供了一种有价值的动物模型....
摘要:[目的]探讨猪卵母细胞体外胚胎生产的最佳激活条件.[方法]以不同电场强度(100,150,200,250V/mm)、脉冲时间(2,30,40,60,80 μs)、电脉冲次数(1,2,3次)的电激活方法及电激活(是电场强度为200 V/mm,脉冲时间为60 μs,激活次数为1次)联合化学处理(NCSU-23+CHX、NCSU-23+6-DMAP和NCSU-23+CHX+6-DMAP)方法对猪卵母细胞进行激活,研究不同激活方法对猪卵母细胞孤雌活化的影响.[结果]电激活猪卵母细胞时,在200 V/mm、60 μs、1次激活的条件下其卵裂率和囊胚率均最高.电激活联合NCSU-23+CHX、NCSU-23+6-DMAP、NCSU-23+CHX+6-DMAP化学处理时,在孤雌激活后期的卵裂率分别为69.17%,82.31%和79.67%,囊胚率分别为24.17%,39.46%和39.84%,在统计学上各处理间无显著差异.[结论]猪卵母细胞孤雌激活的最佳条件,是在电场强度为200 V/mm,脉冲时间为60 μs.激活次数为1次的电激活后,联合NCSU-23+6-DMAP处理4 h,再移入胚胎培养液NCSU-23+4 g/L BSA中继续孵育(40±4)h....
摘要:对24例上海白猪进行戊巴比妥钠、硫喷妥钠、酒精麻醉以及混合麻醉的比较,试验证明耳缘静脉滴注硫喷妥钠与戊巴比妥钠混合麻醉法效果最好,麻醉良好状态达到83.3%,可以用作胚胎移植时外科手术麻醉的安全方法....
摘要:慢病毒能够感染分裂细胞和非分裂细胞,因而被发展成为重要的转基因载体,已成为制备转基因动物的一种工具,转基因效率明显提高.该文介绍了制备转基因动物的技术方法,比较了慢病毒载体制备转基因动物的特点和优势,介绍了慢病毒载体安全设计的发展,并将近年来国内外利用慢病毒载体法制备转基因动物的研究进行了概述....
[博士论文] 刘吉宏
兽医 扬州大学 2018(学位年度)
摘要:微渗透泵(Mini Osmotic Pump)利用渗透压提供药物释放的驱动力,不仅能将药物持续、定量、定点地缓释到给药部位,还能在恒定状态下持续观察注射药物在动物体内的作用情况。与传统给药方法相比,微渗透泵给药有明显的优点,已广泛用于实验动物造模及药理学研究,其中许多应用已成为经典的实验动物模型。不同规格微渗透泵的载药量、释药速率和有效时间均有不同,因此具体使用时需要进行优化调整,才能满足不同科研的需要。
  Alzet微渗透泵可在动物清醒状态下进行连续给药,单泵持续时间可长达6周。本研究比较了该类微渗透泵与机械注射泵的体内释药速率,释药3h、8h和24h后的血浆药物浓度无明显差异,两种释药方法均可达到恒速水平。因此确定了该研究的应用基础
  本研究选择2001D、2001、2002、2004、2006等6种型号在大鼠上进行测试,微渗透泵的体外释药速度分别达到7.7±0.3ul/h和23.6±1.6、11.7±0.8、5.9±0.4、3.7±0.2ul/day,达到说明书要求。体外测试发现正确的药物填充和适当的孵育时间对微渗透泵达到理想释药速率至关重要,延长孵育启动时间有助于微渗透泵恒速释药。
  为了评价微渗透泵植入对大鼠的影响,本研究比较了微渗透泵皮下植入与口服给药的动物体重和摄食量的变化。微渗透泵皮下植入组术后第一天体重和摄食量下降极显著,第二天体重不再下降;摄食量下降极显著,术后第三天基本恢复正常,与比口服给药组相比体重恢复速度显著加快。
  本研究优化了手术方案,优化了大鼠颈静脉插管和髓鞘插管模型,术后三天动物体重恢复正常,可以进行相应的测试和实验。
  用5%福尔马林成功建立了大鼠福尔马林急性模型,两阶段疼痛期明显,不同性质的镇痛药都可缓解福尔马林引起的疼痛,极显著降低二期持续疼痛时长。5mg/kg吗啡可显著抑制大鼠福尔马林模型1期急性疼痛,极显著抑制二期持续疼痛;100mg/kg加巴喷丁和布洛芬可极显著抑制大鼠福尔马林模型1期急性疼痛,极显著抑制二期持续疼痛;不同浓度瑞普巴林对大鼠福尔马林急性模型1期急性疼痛没有显著抑制作用;10mg/kg和30mg/kg瑞普巴林可极显著抑制二期持续疼痛,3mg/kg不能显著抑制二期疼痛期疼痛。通过比较发现人工观察和疼痛自动检测仪都可记录福尔马林造成的急性疼痛,人工观察的精度相对较高,自动检测仪的通量较大,根据实验需要可以采用不同的监测方法。
  测试药物原生物毒素Ⅱ(ProTx-Ⅱ)是Nav1.7钠离子通道选择性抑制剂。稳定性研究结果显示,生理盐水不适合作为ProTx-Ⅱ的溶剂,4小时内药物浓度即下降50%。吐温80可维持ProTx-Ⅱ的稳定性,最低有效浓度为0.025%。微渗透泵颈静脉释药可安全地将大鼠血液ProTx-Ⅱ浓度提高到125±18nM,能显著抑制福尔马林急性模型30%二期持续疼痛期的疼痛,并可延迟二期持续疼痛期的发生。大鼠单次静脉注射ProTx-Ⅱ的最大耐受量为0.1mg/kg,不能抑制一期急性疼痛期和二期持续疼痛。微渗透泵髓鞘内释药可直接将ProTx-Ⅱ释放入大鼠中枢系统,25ng/hr和7.5ng/hr剂量组的福尔马林急性疼痛显著抑制,没有明显的药物剂量依赖性。
  微渗透泵在实验动物中的释药技术已相对成熟,大鼠的福尔马林急性疼痛模型也被广泛的应用于止痛药物的测试中,本文创新的结合两个技术,使用微渗透泵缓释的方式测试大鼠的福尔马林急性疼痛模型,与常规长期给药方式相比不需要更多的人为操作,对动物应激显著减少,能避免起始血药浓度过高导致的毒副作用,平缓持久的药物浓度具有更好的治疗效果,可以作为大鼠药理学研究的理想工具。
[硕士论文] 刘吉宏
动物遗传育种与繁殖 扬州大学 2008(学位年度)
摘要:体细胞克隆猪在人的动物疾病模型和人类异种器官移植方面具有巨大的优势和应用潜力,已成为当今体细胞克隆领域研究的热点。本研究的目的在于研究猪体细胞核移植的技术条件,简化核移植方法及程序,提高核移植效率,建立高效的体细胞核移植技术研究平台,为高效快速生产克隆动物,制作转基因克隆动物打下基础。本实验通过对猪的卵母细胞的成熟、供体细胞的制备、体细胞克隆胚胎的构建、胚胎移植和对出生克隆猪的鉴定等几个方面的研究,优化了实验条件,建立了比较完善的系统,成功的生产了上海首例克隆猪。研究结果如下: 1.比较不同基础培养液对卵丘.卵泡复合体(COCs)体外成熟的影响,结果显示,在NCSU-23和mTCM-199培养液中,COCs的成熟率较高,分别达到86.89%和89.94%,与TCMl99比较(成熟率75.37%)差异显著,而前二者差异不显著,说明NCSU-23和mTCM-199培养液是较为理想的成熟培养液,两种培养液均可应用于COCs培养成熟,可获得较好的成熟率。 2.比较了纺锤体观测(spindle-view)系统去核方法和盲吸法对猪卵母细胞的去核率,结果显示,纺锤体观测(spindle-view)系统去核法,去核率为97.89%,盲吸法去核率为60.32%。两者之间差异极显著(p<0.01)。说明spindle-view系统去核法是一种安全、高效的去核方法。 3.供体细胞选择了巴马香猪的胎儿成纤维细胞、耳成纤维细胞和颗粒细胞,其中颗粒细胞的融合率较低(64.23%),与猪胎儿成纤维细胞(74.55%)和耳成纤维细胞(77.55%)的融合率比较差异显著,而在卵裂率和囊胚率上差异不显著。通过本实验证明猪的胎儿成纤维细胞可以用于克隆猪的制作。 4.通过对克隆胚胎的体外培养,在B2和NCSU-23中卵裂胚数(73.55%vs79.19%)和囊胚数(19.83%vs21.48%),差异都不显著。结果表明B2和NCStJ-23都是比较适合猪克隆胚发育的体外培养液。4.通过多次的克隆胚胎移植手术,本实验建立了比较完善的猪胚胎移植体系,移植后成功出生克隆猪一只。通过外型特征观察、微卫星检测证明这只巴马小香猪和供体胚胎干细胞的遗传物质一致。选择经产母猪作为代孕母猪,在输卵管深部移植200枚左右克隆胚胎加孤雌胚胎,通过比较春秋冬季移植效果,冬季未有出生小猪,春末出生克隆猪一头,结果表明移植季节最好选择春夏季。
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