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摘要:目的:研究甘草酸抑制中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(HaCaT)凋亡的机制.方法:以不同浓度的甘草酸作用于人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞),噻唑蓝比色(MTT)法筛选药物的有效安全浓度;用30 mJ/cm2的UVB照射HaCaT细胞,制备光老化模型,MTT法检测细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞总凋亡率;实时定量PCR(RT-PCR)法检测Bax、Bcl-2 mRNA表达水平变化;Western Blot法检测各组细胞上清中Bax、Bcl-2蛋白表达量.结果:1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L甘草酸为最佳有效安全浓度.与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P<0.01);细胞总凋亡率显著显著升高(P<0.01);Bax mRNA表达水平显著升高,Bcl-2mRNA表达水平显著降低(P<0.01);Bax蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.01).与UVB组比较,1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L甘草酸+UVB组细胞增殖率显著升高(P<0.01);细胞总凋亡率显著降低(P<0.01);Bax mRNA表达水平显著降低,Bcl-2 mRNA表达水平显著升高(P<0.01,P<0.05);Bax蛋白表达量显著降低,Bcl-2蛋白表达量显著升高(P<0.01,P<0.05).结论:甘草酸能抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其机制与其下调促凋亡基因Bax mRNA和蛋白的表达,上调抑凋亡基因Bcl-2 mRNA和蛋白的表达有关....
摘要:目的 研究甘草苷对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(HaCaT)光老化的保护作用及机制.方法 用不同浓度的甘草苷作用于HaCaT细胞,噻唑蓝比色(MTr)法筛选甘草苷的安全有效浓度;用30 mJ/cm2的UVB照射HaCaT细胞,建立光老化模型.用10-7、10-6、10-5 mol/L的甘草苷处理甘草苷+UVB组细胞24 h,MTT法检测甘草苷对光老化HaCaT细胞增殖率的影响;试剂盒检测HaCaT细胞中谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印记法检测HaCaT细胞中白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)蛋白表达量.结果 10-7、10-6、10-5 mol/L甘草苷对HaCaT细胞无明显的促增殖与抑制作用(P>0.05),为最佳安全有效浓度.与空白组相比,UVB组细胞增殖率显著降低,GSH、CAT活性显著降低,MDA含量显著升高,IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量显著升高(P<0.01).与UVB组相比,10-7、10-6、10-5 mol/L甘草苷+UVB组细胞增殖率显著升高,GSH、CAT活性明显上升,MDA含量显著降低,IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量显著降低(P< 0.05或P<0.01).结论 甘草苷对UVB诱导的HaCaT细胞光老化有保护作用,其机制与其提高抗氧化酶活性,抑制炎性因子的产生有关....
摘要:目的:研究甘草酸对UVB光老化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)的保护作用及炎症因子影响.方法:采用30 mJ/cm2的UVB照射HaCaT细胞,建立光老化模型;用10-7、10-6、10-5 mol/L甘草酸处理光老化细胞24 h.MIT法检测细胞增殖率;采用试剂盒检测各组细胞SOD、GSH及CAT活性;Western Blot法检测各组细胞IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量.结果:与空白组相比,模型组GSH、SOD及CAT活性显著降低(P<0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量显著升高(P<0.01);与模型组相比,不同浓度甘草酸可使SOD、GSH及CAT活性显著升高(P<0.01),IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01).结论:甘草酸能保护UVB诱导的HaCaT细胞光老化,其机制可能与其抑制氧化损伤,减少炎症因子的产生有关....
摘要:目的:研究甘草酸对UVB(中波紫外线)诱导人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)凋亡的影响.方法:以不同浓度的甘草酸作用于HaCaT细胞,噻唑蓝比色(MTT)法筛选药物的有效安全浓度;用总剂量为30 mJ/cm-2的UVB照射HaCaT细胞,制备光老化模型,MTT法检测细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞总凋亡率;实时定量PCR(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)法分别检测Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达水平.结果:1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L甘草酸为最佳有效安全浓度.与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P<0.01),细胞总凋亡率显著显著升高(P<0.01),Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01).与UVB组比较,1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L甘草酸+UVB组细胞增殖率显著升高(P<0.01),细胞总凋亡率显著显著降低(P<0.05,P<0.01),Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01).结论:甘草酸能抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其机制与其降低细胞总凋亡率,抑制Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的表达有关....
摘要:目的: 研究甘草苷抑制UVB 诱导HaCaT 细胞凋亡的机制.方法: 以不同浓度的甘草苷作用于人皮肤角质形成细胞(HaCaT 细胞),MTT 法筛选药物的有效安全浓度; 用30 mJ/cm2 的UVB 照射HaCaT 细胞,制备光老化模型,MTT 法检测细胞增殖率; 试剂盒法测定SOD、GSH-Px 活性; 流式细胞仪检测各组细胞中ROS 含量和总凋亡率; Western Blot 法检测各组细胞上清中Bax、Bcl-2 蛋白表达量.结果: 10-7、10-6、10-5 mol/L 甘草苷对HaCaT 细胞无明显促增殖与抑制作用(P>0. 05); 甘草苷可提高SOD、GSH-Px 活性,降低ROS 含量和细胞凋亡率,抑制Bax 蛋白的表达,促进Bcl-2 蛋白的表达(P<0. 05 或P<0. 01).结论: 甘草苷能抑制UVB 诱导的HaCaT 细胞凋亡,其机制可能与抗氧化损伤、抑制Bax 蛋白的表达、促进Bcl-2 蛋白的表达有关....
摘要:目的 研究黄芩素对皮肤光老化模型中细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的影响.方法 使用照射强度为0.5 mJ/cm2的UVB型紫外线辐照计,照射不同时间制备光老化细胞模型.细胞分为对照组,模型组,黄芩素1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L组.使用流式细胞仪检测各组细胞中活性氧(ROS)量的变化,qRT-PCR检测各组细胞中白细胞介素-1α(IL-1oα)、IL-8 mRNA表达量,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测各组细胞中IL-1α、IL-8、p-ERK、ERK蛋白的表达量.结果 与对照组比较,模型组细胞出现皱缩、椭圆形,细胞边缘有破损现象,趋于死亡状态.与模型组相比,1×10-mol/L黄芩素组细胞破损现象减轻,1×10-6 mol/L黄芩素组细胞无明显的皱缩及破损现象,1×10-5 mol/L黄芩素组细胞状态良好,接近于正常状态;与对照组比较,模型组细胞中ROS的量显著升高(P<0.01).与模型组比较,1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L黄芩素组细胞中ROS的量显著降低(P<0.01);与对照组比较,模型组IL-1α、IL-8 mRNA表达量显著升高(P<0.01).与模型组比较,1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L黄芩素组细胞中IL-1α、IL-8 mRNA的表达量显著降低(P<0.01);与对照组比较,模型组细胞IL-1α、IL-8、p-ERK蛋白表达量显著升高(P<0.01),ERK蛋白表达量不变.与模型组比较,1×10-7、1×10-6、1×10-5 mol/L黄芩素组细胞中IL-1α、IL-8、p-ERK蛋白表达量显著降低(P<0.05、0.01),ERK蛋白表达量不变.结论 黄芩素对HaCaT细胞光老化模型的保护作用主要通过降低ROS的量,阻断ERK信号通路,进而降低炎症因子的产生实现的....
摘要:目的:研究甘草次酸对光老化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)的保护作用及NF-κB信号通路的影响.方法:用30mJ/cm2的UVB照射HaCaT细胞,建立光老化模型;用不同浓度(10-7、10-6、10-5mol?L-1)的甘草次酸处理光老化HaCaT细胞24h.MTT法检测甘草次酸对细胞活性的影响;试剂盒法检测各组细胞上清SOD、GSH活性及MDA含量;Western Blot法检测各组细胞NF-κBP50和NF-κBP65蛋白表达量.结果:模型组细胞与空白组细胞相比,模型组细胞增殖率显著降低(P<0.01);GSH、SOD活性显著降低,MDA含量显著升高(P<0.01);NF-κBP50、NF-κBP65蛋白表达量显著升高(P<0.01).甘草次酸处理的HaCaT细胞与模型组细胞相比,甘草次酸组细胞增殖率显著升高(P<0.01);GSH、SOD活性显著升高,MDA含量显著降低(P<0.01);NF-κBP50、NF-κBP65蛋白表达显著下降(P<0.05,P<0.01).结论:甘草次酸能显著保护UVB诱导的HaCaT细胞光老化,其机制可能与其抑制氧化损伤,阻断NF-κB信号通路,抑制NF-κBP50、NF-κBP65蛋白表达有关....
摘要:目的:研究补骨脂素对UVB诱导HaCaT细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响.方法:体外培养人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞),取对数生长期的细胞,随机分为空白对照组、UVB组和补骨脂素组,并用30mJ·cm-2的中波紫外线(UVB)照射UVB组和补骨脂素+UVB组,制备光老化模型.MTT法分别测定补骨脂素对正常HaCaT细胞及光老化HaCaT细胞增殖率的影响;活性氧自由基(ROS)试剂盒测定各组细胞中ROS含量;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒测定各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定各组细胞中p53、Bcl-2及Caspase-3蛋白的表达量.结果:与空白组比较,10-7、10-6、10-5 mol·L-1补骨脂素对HaCaT细胞增殖率无显著影响(P>0.05),可用于后续实验研究.与空白组比较,UVB组ROS含量和细胞凋亡率显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01),p53及Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.01).与模型组比较,10-1、10-6、10-5 mol·L-1补骨脂素+UVB组ROS含量和细胞凋亡率显著降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01),p53及Caspase-3蛋白表达水平显著下降(P<0.05,P<0.01).结论:补骨脂素可以通过降低细胞ROS含量和凋亡率,调控凋亡相关细胞因子p53、Bcl-2及Caspase-3的表达水平,抑制UVB诱导的细胞凋亡....
摘要:目的:研究黄芩素对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞凋亡及相关细胞因子表达的影响.方法:体外培养人皮肤角质形成细胞(HaCaT),取对数生长期的细胞,随机分为空白组、模型组和黄芩素组,并用30 mJ·cm-2的UVB照射模型组和黄芩素组,建立光老化模型.噻唑蓝(MTT)比色法筛选黄芩素的有效安全浓度,并测定黄芩素对光老化HaCaT细胞增殖率的影响;活性氧自由基(ROS)试剂盒测定各组细胞中ROS含量;Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒测定各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定各组细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)及Caspase-9蛋白表达水平.结果:筛选出1×10-,1×10-6,1×10-5mol·L-1黄芩素为最佳有效安全浓度.与空白组比较,模型组ROS含量和细胞凋亡率显著升高(P<0.01),BcL-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著升高(P<0.01).与模型组比较,1×10-7,1 ×10-6,1 ×10-5mol·L-1黄芩素组ROS含量和细胞凋亡率显著降低(P <0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P <0.05,P<0.01),Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著下降(P <0.05,P<0.01).结论:黄芩素可以通过降低细胞ROS含量和凋亡率,调控Bcl-2家族中抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,降低凋亡相关细胞因子Caspase-3和Caspase-9的表达水平,抑制UVB诱导的细胞凋亡....
摘要:皮肤位于人体最外层,不仅具有排汗、防寒作用,而且还具有抵御外来刺激作用,是人体第一道防御系统[1]. 内源性老化是人体自然衰老,外源性老化主要是由于物理和化学因素诱发的,其中,UV诱导皮肤老化,称为光老化[2]. 如今工业化生产日益增加,臭氧层遭到严重破坏,皮肤伤害也逐渐增加,主要表现为红斑、皱缩、粗糙、无光泽,严重可导致肿瘤发生等[3]. 随着人们对美容的重视,皮肤光老化越来越引起人们关注,探索中药预防及治疗皮肤光老化已成当今重点....
摘要:目的:研究甘草次酸对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(HaCaT)细胞光老化的保护作用及相关炎症因子影响.方法:用不同浓度的甘草次酸作用于HaCaT细胞,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖率,筛选出药物最佳有效浓度;用30 mJ·cm-2的UVB照射HaCaT细胞,建立光老化模型,用3个不同浓度的甘草次酸作用于光老化细胞,MTT比色法检测光老化HaCaT细胞增殖率;谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),过氧化氢酶(CAT)和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒分别检测甘草次酸对光老化HaCaT细胞中GSH-Px,CAT和LDH活性的影响;蛋白免疫印记法(Western blot)检测甘草次酸对光老化HaCaT细胞中白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6和肿瘤坏死因子-a(TNF-α)蛋白表达量的影响.结果:筛选出1×10-7,1×10-6,1×10-5 mol·L-1甘草次酸为最佳有效浓度.与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P<0.01),GSH-Px,CAT活性显著降低,LDH活性显著升高(P<0.01),IL-1β,IL-6,TNF-α蛋白表达量显著升高(P<0.05,P<0.01).与UVB组比较,1×10-7,1×10-6,1×10-5 mol·L-1甘草次酸+UVB组细胞增殖率显著上升(P<0.01),GSH-Px,CAT活性显著上升,LDH活性显著降低(P<0.01),IL-1β,IL-6,TNF-α蛋白表达量显著降低(P <0.05,P <0.01).结论:甘草次酸可通过提高GSH-Px,CAT活性,降低LDH活性,减少炎症因子IL-1β,IL-6和TNF-α的表达,从而抑制UVB诱导HaCaT细胞光老化....
摘要:目的:研究甘草苷对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(HaCaT)凋亡的影响.方法:以不同浓度的甘草苷作用于HaCaT细胞,噻唑蓝(MTT)比色法筛选甘草苷的有效安全浓度;用30 mJ·cm-2的UVB作用于HaCaT细胞,建立光老化模型,MTT比色法检测光老化HaCaT细胞增殖率;流式细胞术检测各组细胞中活性氧自由基(ROS)含量和总凋亡率;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测光老化HaCaT细胞中半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3),半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9) mRNA表达水平;蛋白免疫印记法(Western blot)检测光老化HaCaT细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量.结果:筛选出甘草苷的最佳有效安全浓度为1×10-7,1 × 10-6,1×10-5mol·L-1.与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P<0.01),细胞中ROS含量和总凋亡率显著升高(P<0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著升高(P<0.01);Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著升高(P<0.01).与UVB组比较,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol·L-1甘草苷+UVB组细胞增殖率显著升高(P<0.01);细胞中ROS含量和总凋亡率显著降低(P <0.05,P<0.01),Caspase-3,Caspase-9 mRNA表达水平显著降低(P< 0.05,P<0.01);Bcl-2蛋白表达量显著升高(P <0.05,P<0.01),Caspase-3,Caspase-9蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01).结论:甘草苷能通过促进抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,减少促凋亡相关细胞因子Caspase-3,Caspase-9 mRNA和蛋白的表达,从而抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡....
[硕士论文] 傅云
中医外科学 黑龙江中医药大学 2018(学位年度)
摘要:目的:
  研究来源于中药甘草中的活性成分甘草苷对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(HaCaT)光老化的保护作用及其作用机制,为有效成分甘草苷预防和治疗皮肤光老化提供理论依据。
  方法:
  1.用不同浓度的甘草苷作用于HaCaT细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率,筛选出药物的最佳有效安全浓度。
  2.用30mJ/cm2的UVB照射HaCaT细胞,制备光老化模型,将筛选出的有效安全浓度作用于光老化HaCaT细胞,MTT法测定甘草苷对光老化HaCaT细胞增殖率的影响。
  3.用试剂盒分别测定甘草苷对光老化HaCaT细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量的影响。
  4.蛋白免疫印记(Western Blot)法检测甘草苷对光老化HaCaT细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)及半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9)蛋白表达量的影响。
  5.流式细胞术检测甘草苷对光老化HaCaT细胞总凋亡率的影响。
  6.实时定量PCR(RT-PCR)法检测甘草苷对光老化HaCaT中Bcl-2、Bax、Caspase-3及Caspase-9mRNA表达水平的影响。
  结果:
  1.与空白对照组比较,10-10、10-9、10-8mol/L甘草苷组细胞增殖率显著升高(P<0.05,P<0.01),可明显促进细胞增殖;10-4、10-3mol/L甘草苷组细胞增殖率显著降低(P<0.01),可明显抑制细胞增殖;10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷组细胞增殖率无统计学差异(P>0.05),对细胞无明显的促增殖与抑制作用,为最佳有效安全浓度。
  2.与空白对照组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P<0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组细胞增殖率显著升高(P<0.01)。
  3.与空白对照组比较,UVB组SOD、GSH、CAT活性显著降低(P<0.01),MDA、ROS含量显著升高(P<0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组SOD、GSH、CAT活性明显上升(P<0.05,P<0.01),MDA、ROS含量显著降低(P<0.01)。
  4.与空白对照组比较,UVB组IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达量显著升高(P<0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。
  5.与空白对照组比较,UVB组细胞总凋亡率显著升高(P<0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组细胞总凋亡率显著降低(P<0.01)。
  6.与空白对照组比较,UVB组Bcl-2mRNA表达水平显著降低(P<0.01),Bax、Caspase-3及Caspase-9mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组Bcl-2mRNA表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01),Bax、Caspase-3及Caspase-9mRNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。
  7.与空白对照组比较,UVB组Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.01),Bax、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达量显著升高(P<0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组Bcl-2蛋白表达量显著升高(P<0.05,P<0.01),Bax、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。
  结论:
  甘草苷可促进光老化HaCaT细胞的增殖,提高细胞中SOD、GSH、CAT活性,降低MDA、ROS含量,抑制炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,降低细胞总凋亡率,促进抗凋亡细胞因子Bcl-2mRNA及蛋白的表达,抑制促凋亡相关细胞因子Bax、Caspase-3、Caspase-9mRNA及蛋白的表达,从而有效的抑制皮肤光老化。
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