绑定机构
扫描成功 请在APP上操作
打开万方数据APP,点击右上角"扫一扫",扫描二维码即可将您登录的个人账号与机构账号绑定,绑定后您可在APP上享有机构权限,如需更换机构账号,可到个人中心解绑。
欢迎的朋友
万方知识发现服务平台
找到 1 位学者
扬州大学
获取范围
  • 1 / 1
找到 3 条结果
[硕士论文] 余昕健
动物遗传育种与繁殖 扬州大学 2019(学位年度)
摘要:为探究lncRNA在鸡生殖细胞中的调控作用,以如皋黄鸡受精蛋为试验材料,基于高通量测序筛选结果,利用RACE技术获取lncRNA-CEPT8序列全长,通过荧光定量检测和核质分离试验确定lncRNA-CEPT8的富集位置,并进行ORF开放阅读框预测及构建原核融合表达载体,提取蛋白质后利用Western blot技术检测lncRNA-CEPT8编码的小肽.结果 表明:lncRNA-CEPT8全长为1 248 bp,在鸡原始生殖细胞质中富集,具有大小为246 bp且编码81个氨基酸的ORF,Western blot检测结果表明lncRNA-CEPT8编码一条大小约为9 ku的小肽.这一研究为进一步探究lncRNA-CEPT8编码的小肽在鸡原始生殖细胞中的调控作用及其对生殖细胞的影响奠定了基础....
摘要:本研究旨在检测CREPT(cell-cycle related and expression-elevated protein in tumor)基因的组织表达特异性,克隆其编码区并构建重组载体转染DF-1 (D fibroblast-1,DF-1)细胞并制备多克隆抗体,为初步研究鸡(Gallus gallus) CREPT基因参与调控细胞周期的生物学功能提供理论依据.以鸡生殖嵴cDNA为模板扩增CREPT基因CDS区,并对该基因进行了蛋白质结构预测和组织表达谱分析.将该基因与pcDNA3.1和pEGFP-N1载体相连获得重组表达载体pcDNA3.1-CREPT和pEGFP-CREPT之后,转染鸡DF-1细胞,并采用基因免疫法制备CREPT基因多克隆抗体并检测效价,利用qRT-PCR检测过表达CREPT基因后DF-1细胞内相关基因的表达情况.生物信息学分析发现,鸡CREPT编码区序列总长978bp,编码325个氨基酸,该氨基酸序列中存在一个RPR结构域(regulation of nuclear pre-mRNA domain)和卷曲结构域;以原鸡(G.gallus)CDS序列为模板成功克隆的如皋黄鸡(G.domesticus)CREPT基因长978 bp,测序结果准确,与原鸡CDS序列一致,同源性100%;组织表达谱分析显示,CREPT在睾丸、卵巢和大脑中mRNA表达量较高(P<0.01),而在肠组织(P<0.01)、骨骼肌(P<0.05)和脾脏(P<0.05)中的mRNA表达量较低;成功构建重组表达载体pcDNA3.1-CREPT和pEGFP-CREPT;转染融合表达载体pEGFP-CREPT后显示,CREPT表达于DF-1细胞质中;使用基因免疫法制备多克隆抗体血清,免疫荧光检测(immunogen fluorescent assay,IFA)检测显示,制备的多克隆抗体最佳效价为1:10,Western blot证实,pcDNA3.1-CREPT真核表达载体成功表达且抗血清效果良好,qPCR检测结果表明,pcDNA3.1-CREPT载体能够在DF-1上过表达CREPT基因,并引起细胞周期调控相关基因p15RS(P 15 related gene on G 1/S progression)、转录因子4(transcription factor 4,TCF4)、细胞周期蛋白D1(cyclinDI)和β-链蛋白(b-catein)的表达变化.本研究成功克隆了鸡CREPT基因,并制备了具有特异性的多克隆抗体,该基因在DF-1细胞质中表达,CREPT基因的表达能下调pl5RS基因的表达(P<0.01),上调TCF4(P<0.05)、cyclinD1 (P<0.01)和b-catein (P<0.01)的表达,该研究结果为进一步研究鸡CREPT基因的生物学功能提供了理论依据....
公   告

北京万方数据股份有限公司在天猫、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!查看详情

手机版

万方数据知识服务平台 扫码关注微信公众号

万方选题

学术圈
实名学术社交
订阅
收藏
快速查看收藏过的文献
客服
服务
回到
顶部