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摘要:目的 探讨去卵巢对大鼠颌骨成骨细胞增殖与成骨分化能力的影响.方法 建立去卵巢大鼠骨质疏松模型,分离培养假手术组和去卵巢组颌骨成骨细胞并进行形态学观察.采用CCK-8法检测假手术组和去卵巢组大鼠颌骨成骨细胞的增殖能力差异.通过碱性磷酸酶染色与活性测定、矿化结节茜素红染色与定量、成骨相关基因及蛋白表达检测,探讨去卵巢对大鼠颌骨成骨细胞增殖及成骨分化能力的影响.结果 假手术组和去卵巢组大鼠均可成功分离培养颌骨成骨细胞,两组细胞均可贴壁生长,细胞形态未见显著差异.与假手术组相比,去卵巢大鼠颌骨成骨细胞的增殖能力,碱性磷酸酶染色与活性均显著增高;但去卵巢大鼠颌骨成骨细胞的Runx2和OC在mRNA与蛋白水平的表达上及体外矿化结节形成能力方面皆显著低于假手术组.结论 去卵巢可影响大鼠颌骨成骨细胞的增殖与成骨分化能力,研究结果将为探讨颌面部骨组织骨质疏松的发病机制与防治提供实验依据....
摘要:目的 探讨骨质疏松大鼠骨髓基质细胞膜片的构建及基本生物学特性.方法 建立大鼠绝经后骨质疏松症(PMOP)模型,分离培养骨质疏松大鼠骨髓基质细胞(O-rBMSCs),并以O-rBMSCs为种子细胞构建细胞膜片.通过倒置显微镜、HE染色、扫描电镜及透射电镜对细胞膜片进行形态学检测;以免疫组织化学染色检测细胞外基质相关蛋白的表达情况.结果 成功建立了大鼠PMOP模型,体外分离培养的O-rBMSCs具有多向分化潜能.显微镜下可见细胞复层生长,采用富含维生素C的培养基连续培养10 d左右即可获得白色膜样结构,该细胞膜片具有较好的弹性,HE染色及扫描电镜观察发现O-rBMSCs膜片由多层细胞及丰富的细胞外基质组成.透射电镜下可观察到细胞间连接.免疫组织化学染色示O-rBMSCs膜片高表达Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白.结论 O-rBMSCs体外采用富含维生素C的培养基连续培养可构建细胞膜片,该细胞膜片富含细胞外基质,有望应用于骨质疏松机体的组织再生....
摘要:目的 体外分离培养骨质疏松大鼠骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs)并探讨其生物学行为.方法 采用双侧卵巢切除术建立大鼠绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMO)动物模型并分离培养骨质疏松大鼠BMMs.通过倒置显微镜和瑞氏-姬姆萨染色对细胞进行形态学观察;通过CCK-8法检测骨质疏松大鼠BMMs的增殖能力;运用免疫荧光染色及荧光定量PCR法分析骨质疏松状态下大鼠BMMs的极化及炎症相关因子的表达情况.结果 成功建立大鼠PMO模型并分离培养骨质疏松大鼠BMMs.骨质疏松大鼠BMMs主要呈多角形及煎蛋样.与假手术组相比,BMMs的增殖能力较高.免疫荧光染色可见骨质疏松大鼠BMMs高表达CCR7,低表达MRC1.荧光定量PCR检测结果提示,骨质疏松大鼠BMMs促炎因子TNF-α及IL-6的表达较高,而抗炎因子IL-10及TGF-β的表达相对较低.结论 去卵巢可影响大鼠BMMs的增殖能力、细胞表面极化标志物以及炎症相关因子的表达水平....
摘要:目的 探讨牙骨质蛋白1(cementum protein 1,CEMP1)基因修饰骨质疏松大鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)与β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)体外复合培养的可行性.方法 体外培养骨质疏松大鼠BMSCs,将携带有CEMP1基因的慢病毒LV-CEMP1-EGFP转染BMSCs,采用荧光显微镜观察转染情况,通过流式细胞仪检测转染率,通过实时荧光定量PCR检测转染后BMSCs中CEMP1基因的表达,Western Blot及免疫细胞化学染色检测BMSCs中CEMP1蛋白的表达情况.将CEMP1基因修饰的BMSCs与β-TCP体外复合培养,在荧光显微镜和扫描电镜下观察细胞的生长状况.结果 LV-CEMP1-EGFP具有较高的转染率,CEMP1基因修饰的BMSCs可高表达CEMP1,且在β-TCP上保持良好的生长状态.结论 CEMP1基因修饰骨质疏松大鼠BMSCs与β-TCP复合培养,有望应用于骨质疏松状态下的牙周组织再生研究....
摘要:目的:探讨人瘦素(human leptin,hLEP)基因修饰的大鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)与引导组织再生胶原膜(Bio-Gide)复合体外构建组织工程化复合物的可行性.方法:全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs,将携带瘦素基因的腺病毒Ad-hLEP-EGFP感染BMSCs后,倒置荧光显微镜下观察绿色荧光,酶联免疫吸附法检测感染细胞hLEP的表达,MTT法检测感染后细胞的增殖活性.将经Ad-hLEP-EGFP感染后的BMSCs与Bio-Gide胶原膜体外复合培养24h后,激光共聚焦显微镜和扫描电镜观察瘦素基因修饰组织工程复合物的构建情况.结果:采用Ad-hLEP-EGFP感染,可使BMSCs高表达hLEP,且细胞的增殖能力不变.扫描电镜结果显示,瘦素基因修饰的BMSCs在Bio-Gide胶原膜上生长良好,并分泌胞外基质.激光共聚焦显微镜显示瘦素基因修饰的BMSCs可迁移到Bio-Gide膜的不同层面.结论:瘦素基因修饰的BMSCs能与Bio-Gide胶原膜复合,生长良好,可成功构建瘦素基因修饰的组织工程化复合物,该复合物有望用于牙周组织工程研究....
摘要:目的:通过对临床前研究的组织学研究结果进行评估,系统分析生物材料单独应用或联合应用对牙周骨内缺损的再生效果.数据来源:研究方案涵盖了系统评价的所有方面.从Medline上搜索相关文献,包括手工检索.结合检索词和一些标准来鉴别、筛选和纳入文献.初期效果变量为采用不同再生材料的重建手术所获得的牙周再生效果,它可通过组织学/组织形态学分析来进行评估.新生牙周膜、新生牙骨质和新生牙槽骨以长度mm或根长比例来表示.根据研究基本情况、研究特点、方法学特点和结论对数据进行提取.仅选择采用组织学分析评估再生材料(如屏障膜、移植材料或生长因子/蛋白)治疗牙周骨内缺损的临床前期研究作为研究对象.所有生物材料单独应用或多种材料联合应用的研究均被纳入.报道了愈合期6周以上的组织学效果测量的研究也被纳入.由于数据的异质性,未采用Meta分析.结论:与对照组(单纯翻瓣术)相比,翻瓣术与单一生物材料或多种生物材料联合应用都能更大程度地促进牙周组织再生.在所使用的生物材料中,自体移植物效果最好.而与翻瓣术相比,应用大多数生物因子的疗效较差....
摘要:目的 探讨体外培养的大鼠颌骨成骨细胞成骨及成血管相关因子的表达情况. 方法 体外分离培养大鼠颌骨成骨细胞,采用碱性磷酸酶染色(ALP)与矿化结节茜素红染色对细胞进行鉴定.应用实时荧光定量聚合酶链反应及酶联免疫吸附法检测细胞成骨与成血管相关细胞因子的表达情况. 结果 体外培养的大鼠颌骨成骨细胞ALP及矿化结节茜素红染色均为阳性.颌骨成骨细胞在高表达成骨相关基因、Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原和骨钙素的同时,在蛋白及基因水平均高表达成血管相关细胞因子血管内皮生长因子、血管生成素1和成纤维生长因子2. 结论 颌骨成骨细胞在成骨分化的同时可通过分泌成血管相关细胞因子参与血管化调控....
摘要:目的 探讨骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)膜片在骨质疏松大鼠牙周组织再生中的作用.方法 将30只Sprague-Dawley大鼠随机分为卵巢切除术组(n=24)和假手术组(n=6),再将24只卵巢切除组大鼠随机分为对照组和细胞膜片组各12只.分离培养大鼠BMSCs并构建细胞膜片,将构建好的细胞膜片植入骨质疏松大鼠下颌牙周组织缺损内,分别于术后10和28 d取材制作组织切片行苏木素—伊红(hematoxylin-eosin,HE)和Masson染色,通过组织学观察和测量,评价BMSCs细胞膜片对骨质疏松状态下牙周组织再生的作用.结果 成功培养构建大鼠BMSCs细胞膜片,组织染色及细胞死活荧光染色结果显示所构建的细胞膜片具有较好的活性,富含胞外基质.将膜片植入骨质疏松大鼠牙周组织缺损10 d和28 d后,对照组牙周缺损区以纤维结缔组织为主,存在少量的新生牙槽骨,新生的牙周韧带和血管样组织;细胞膜片组牙周缺损部位再生明显,新生牙槽骨样组织填充其中,牙根上可见牙骨质新生,且通过新生牙周韧带附着于新生牙槽骨.植入后10 d和28 d,对照组新生牙周组织面积分别为(294.47±94.41)μm2和(1873.96±391.62)μm2,细胞膜片组分别为(13496.27±9831.42)μm2和(85967.72±7632.15)μm2,细胞膜片组较对照组均显著增加(P<0.001).结论 BMSCs细胞膜片有望应用于临床实现骨质疏松状态下的牙周组织再生....
摘要:目的:探讨大鼠不同胚层来源成骨细胞生物学行为的差异.方法:体外培养大鼠颌骨与股骨成骨细胞(MOBs与FOBs),通过MTT比色法检测细胞的增殖能力,采用碱性磷酸酶染色与活性测定、茜素红染色与定量比较细胞的成骨能力.应用荧光定量PCR及ELISA检测细胞成骨与成血管相关细胞因子的表达情况.结果:与FOBs相比,MOBs的增殖能力、成血管相关细胞因子Angpt-1和FGF-2的表达更强,但碱性磷酸酶的表达、体外矿化结节形成能力以及成骨相关基因ALP、RUNX2、Col-Iα1和OC的表达均较低.结论:MOBs与FOBs相比较,增殖力较强,分化能力较弱....
摘要:目的 探讨骨质疏松大鼠骨髓基质细胞(BM SC)膜片体外构建过程中纤维连接蛋白(FN)的表达情况.方法 体外分离培养骨质疏松大鼠BMSC,采用含50μg/mL维生素C的培养基连续培养构建细胞膜片,通过倒置显微镜和组织学染色对细胞膜片进行形态学观察;利用免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链反应及Western-blot检测细胞外基质中FN在基因和蛋白水平的表达情况.结果 采用含维生素C的培养基连续培养可获得含多层细胞及丰富胞外基质的BMSC细胞膜片.免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链反应及Western-blot检测结果显示所构建的细胞膜片高表达FN.结论 以浓度为50μg/mL的维生素C培养基连续培养可成功构建骨质疏松大鼠BM SC细胞膜片,膜片富含FN,有望应用于骨质疏松状态下牙槽骨缺损的治疗....
摘要:目的 观察髓样细胞触发性受体-1(T REM-1)在不同炎症状态下牙龈组织中的表达情况,探讨T REM-1在牙周组织疾病发生过程中的可能作用.方法 选择自愿接受本研究的牙周健康人群、慢性牙龈炎患者和慢性牙周炎患者各10例.取30例患者的牙龈组织,固定后常规石蜡包埋,制作连续切片,H-E染色行组织学观察,免疫荧光染色观察各组牙龈组织中T REM-1的表达情况.结果 T REM-1定位于细胞膜或细胞质,不同状态牙龈组织的牙龈上皮和结缔组织全层中均有T REM-1表达,其中牙周健康组主要分布于牙龈组织上皮层,尤其集中于牙龈上皮基底层,牙龈组织特异性荧光着色强度不明显;慢性牙龈炎组牙龈组织中特异性荧光着色强度为中等阳性,与牙周健康组比较,阳性细胞数量有所增加;慢性牙周炎组牙龈组织中特异性荧光着色强度为强阳性,与牙周健康组及慢性牙龈炎组比较,阳性细胞数量显著增加.结论 T REM-1在牙龈组织中的表达强度随着牙周组织炎症程度的加重而增强,可能在慢性牙周炎的发生和发展进程中起重要作用....
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